İşitsel Nöronları Görselleştirmek için Kama Beyin Dilimlerinin Hazırlanması

Bir fare beyniyle başlayın ve ses işleme için çok önemli olan işitsel nöronları korumak için arka kısmın altında yatay olarak inceleyin.

Arka bölümü manyetik bir diske monte edin. Dilimleme sırasında dokuyu stabilize etmek için bir agar bloğu yerleştirin.

Bölümü, bir bıçakla donatılmış bir vibratomun dilimleme odasının aşamasına aktarın.

Oksijen sağlayan ve nöron bütünlüğünü koruyan soğuk bir tampon ve kabarcık karbojen gazı ekleyin.

Beyin bölümünün üst kısmını çıkarmak için düzgün bir yatay kesim yapın.

Ardından, sahneyi eğin ve işitme siniri kökü görünene kadar kalan bölümü kesmeye devam edin.

Sahne alanını yeniden hizalayın. Ardından, döndürün ve dilimin ince kenarının istenen kalınlığı için bıçak konumunu ayarlayın.

Bıçağı uzaklaştırın ve sahneyi önceki konumuna yeniden hizalayın. Şimdi, beyni bir tarafı daha kalın, diğer tarafı daha ince olacak şekilde kama şeklinde dilimleyin.

Daha kalın taraf işitsel sinir kökünü içerirken, daha ince taraf birbirine bağlı işitsel nöronlara sahiptir.

Burundan boynun arkasına kadar kafatasının orta hattındaki cildi kesmek için bir tıraş bıçağı kullanarak başlayın. Kafatasını ortaya çıkarmak için cildi geriye doğru soyun ve kafatasının tabanından başlayıp buruna doğru devam edin, kafatasında orta hattan bir kesi yapmak için küçük bir makas kullanın.

Lambda dikişinde, beyni açığa çıkarmak için kafatasını soymak için kafatasını orta hattan yanal olarak kulağa doğru her iki taraftan kulağa doğru kesikler yapın. Rostral uçtan başlayarak, optik sinirlerin kopmasına izin vermek için beyni kafatasından nazikçe kaldırmak için küçük bir laboratuvar spatulası kullanın.

Beyni nazikçe geriye doğru çalıştırmaya, ventral yüzeyi açığa çıkarmaya devam edin ve beyin sapının ventral yüzeyine yakın trigeminal sinirleri kesmek için dikkatlice sıkıştırmak için ince forseps kullanın. Preparasyonu soğuk dilimleme çözeltisi ile doldurulmuş bir cam Petri kabına yerleştirin ve tabağı bir diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. Vestibülokoklear sinirleri ortaya çıkarmak için beyin sapına yakın yüz sinirlerini kesin.

Uçları, vestibülokoklear sinirin kafatasından mümkün olduğunca çıktığı foramina itmek için ince forseps kullanın. Her iki taraftaki sinirleri koparmak için çimdikleyin ve sinir kökünü beyin sapına bağlı bırakın.

Meninksleri ve damar sistemini, yamuk gövdesinin yakınındaki beyin sapının ventral yüzeyinden çıkarın. Ardından, beyni kafatasından tamamen kurtarmak için kalan kraniyal sinirleri ve bağ dokusunu sıkıştırın, mümkünse kalan omuriliği korumaya özen gösterin.

Beynin yüzeyini sahneye fikstür için hazırlamak için, beynin ventral tarafını yukarı yerleştirin ve beyin dokusunu stabilize etmek için omuriliği nazikçe hareketsiz hale getirmek için künt bir alet kullanın. Açık forsepsleri beynin içinden yaklaşık 20 derecelik bir açıyla tabağın dibine yerleştirin, böylece uçlar beynin dorsal yüzeyinden optik kiazmaya çıkar ve forsepsleri kesmek için bir tıraş bıçağı kullanın.

Daha sonra, bir santimetreküp% 4'lük bir agar bloğu hazırlayın ve sahnedeki bir dikdörtgene küçük bir damla tutkal yayın. Beyni dikkatlice kaldırmak için forseps kullanın ve fazla sıvıyı bir kağıt havlunun kenarıyla hafifçe vurun. Ardından, tıkalı yüzeyi, dilimleme sırasında ventral yüzey bıçağın yönüne bakacak şekilde yapıştırıcının üzerine yerleştirin ve agar bloğunu destek olarak sırt yüzeyine doğru hafifçe itin.

Kalın tarafta koklear sinir kökü ve ince tarafta medial, olivokoklear nöronlar ve yamuk gövdenin medial çekirdeği ile kama dilimleri elde etmek için, bağlı beyin ile manyetik diski sahne tutucusuna yerleştirin ve tutucuyu, beynin ventral yüzeyi bıçağa doğru yönlendirilmiş bir vibratomun dilimleme odasına yerleştirin. Hazneyi buz gibi soğuk dilimleme solüsyonu ile doldurun ve bıçağı karbojen kabarcıklı solüsyonun içine indirin.

Dilimlerin simetrik olduğundan emin olmak için ilgilenilen bölgeye kaudal dilimler kesin. Ardından, sahneyi yaklaşık 15 derece bir tarafa kaydırın. Bir tarafta işitme siniri kökü yüzeye yakın olana ve dilimin diğer tarafının yüzeyinde fasiyal sinir görülebilene kadar dikkatli bir şekilde dilimlemeye devam edin.

Sahneyi orijinal konumuna 15 derece geri kaydırın ve bıçağı dokudan uzaklaştırın. Sahne tabanını, ince tarafın yan kenarı bıçağa bakacak şekilde 90 derece döndürün ve bıçağı yavaşça dokunun kenarına yaklaştırmadan önce bıçağı birkaç yüz mikron indirin. Bıçak hafifçe geri çekilmişken, bıçağı dilimin ince kenarının istenen kalınlığına kadar indirin.

Bıçağı dokudan geriye doğru hareket ettirin ve ventral yüzey sahne tabanına bakacak şekilde sahne tabanını geriye doğru döndürün. Kama diliminin rostral yüzeyini belirlemek için bir kesim yapın ve dilimi bir santimetre karelik bir arayüz kağıdına aktarın. kaudal yüzey aşağı.

Fasiyal sinir, rostral yüzeydeki dilimin her iki hemisferinde de görünür olmalıdır. Ardından, 30 dakika boyunca toparlanması için dilimi 35 derecelik bir inkübasyon odasına taşıyın.