JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:06 dk. • July 8th, 2025
Bir kültür kabında uygun bir ortama nöronal hücreler ekleyerek başlayın.
Floresan boya ile etiketlenmiş bir manyetik çekirdek içeren floresan manyetik nanopartiküller veya MNP'ler ekleyin.
İnkübasyon sırasında, hücre endositoz yoluyla MNP'yi alır ve manyetize olur.
Bir kültür kabına temiz, manyetize desenli bir alt tabaka yerleştirin. Bu cam alt tabaka, manyetik özelliklere sahip gömülü geometrik desenlere sahiptir.
Alt tabakayı ultraviyole ışığa maruz bırakarak sterilize edin.
Hücre bağlanmasını desteklemek için alt tabakayı kolajen ile kaplayın.
MNP yüklü hücreleri alt tabakaya ekleyin ve inkübe edin.
Substratın dış manyetik alanı, MNP yüklü hücreleri çekerek bağlanmalarını sağlar.
Düzenli aralıklarla belirli bir büyüme faktörü içeren bir ortam ekleyin.
Büyüme faktörü, hücrelerin uzantılar oluşturmasına yardımcı olurken, substratın manyetik modeli bu uzantıların yönelimini yönlendirir.
Düzenli, kaplanmamış 35 milimetrelik bir tabakta 1 milyon hücre tohumlayın. İstenilen MNP konsantrasyonunu elde etmek için hesaplanan MNP süspansiyon hacmini ve farklılaşma ortamını tabağa ekleyin. Hücreleri, MNP'leri ve farklılaşma ortamını karıştırın, ardından çanağı 24 saat boyunca 37 santigrat derecede %5 karbondioksit nemlendirilmiş bir inkübatörde inkübe edin.
Desenli alt tabakayı %70 etanol ile temizleyin ve davlumbazdaki 35 milimetrelik bir kültür kabına yerleştirin. Desenli alt tabakanın altına bir dakika boyunca büyük bir mıknatıs yerleştirin, ardından çanağı yukarı ve uzağa hareket ettirerek ve mıknatısı davlumbazdan çıkararak çıkarın. Ultraviyole ışığını 15 dakika boyunca açın.
Kollajen kaplı bir cam substrat hazırlamak için, kollajen tip I'i %30 etanol içinde 1'e 50 oranında seyreltin. Camı solüsyonla örtün. Tüm çözelti buharlaşana kadar çanağı dört saat boyunca kaputun içinde açık bırakın. Daha sonra steril PBS'de üç kez yıkayın. Hücreleri inkübatörden çıkarın. Hücre süspansiyonunu 200 g'da 5 dakika santrifüjleyin ve süpernatanı atın. Hücreleri 1 mililitre taze farklılaşma ortamında yeniden süspanse edin ve bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın.
35 milimetrelik bir kültür kabında substratın üzerine 105 hücre ekin ve 2 mililitre farklılaşma ortamı ekleyin. Kültürü, 37 santigrat derecede% 5 karbondioksit nemlendirilmiş bir inkübatörde inkübe edin. 24 saat sonra, hücrelere 1 ila 100 taze Murin beta-NGF ekleyin. Farklılaşma ortamını yenileyin ve her iki günde bir taze beta-NGF ekleyin.