JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 1:56 dk • July 8th, 2025
Hücre dışı polimerler ve yapışma proteinleri içeren bir bazal membran matrisi ile kaplanmış çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Bir Rho-kinaz inhibitörü içeren bir büyüme ortamında insan embriyonik kök hücrelerinin tek hücreli bir süspansiyonu ile kuyuları tohumlayın.
Kök hücrenin matrise bağlanmasına izin vermek için inkübe edin.
Hücreler, Rho-kinaz enzimlerini bloke eden ve apoptotik hücre ölümünü önleyen inhibitörü emer.
Bu, hücrelerin hayatta kalmasını teşvik eder ve onları farklılaşmamış bir durumda tutar.
Büyüme ortamını, büyüme faktörleri açısından zengin ve spesifik ALK reseptörlerini hedefleyen inhibitörler içeren bir nöral indüksiyon ortamı ile değiştirin.
Bu inhibitörler reseptörleri ile etkileşime girer ve BMP ve TGF-β sinyal yollarını bloke ederek hücrenin endodermal veya mezodermal öncülere farklılaşmasını önler.
Bu, kök hücrelerin ektodermal öncülere seçici olarak farklılaşmasına yol açar.
Bu ektodermal öncüler, çoğalmak ve daha sonra nöral progenitör hücrelere farklılaşmak için ortamdaki besinleri ve büyüme faktörlerini kullanır.
Hücreleri, 10 mikromolar ROCK inhibitörü ile 2 mililitre mTeSR1 içinde oyuk başına 2 x 105 hücre yoğunluğunda 6 oyuklu bir bazal membran matrisi kaplı plaka üzerine yerleştirin. 24 saat sonra, kültür ortamını 1 mikromolar dorsomorfin ve 5 mikromolar SB431542 ile desteklenmiş nöral indüksiyon ortamı ile değiştirin. Nöral indüksiyonun ilk dört günü boyunca ortamı her gün, daha sonra yedinci günde birleşmeye ulaşılana kadar her gün değiştirin.