Sıçan Beyinlerinden Serumsuz Besiyeri Kullanılarak Mikroglia İzolasyonu ve Kültürü
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 8:59 dk. • July 8th, 2025
Perfüze edilmiş bir sıçan beyni alın. Küçük parçalar halinde kıyın.
Mikroglia da dahil olmak üzere hücreleri serbest bırakmak için dokuyu bir tampon içinde homojenize edin.
Sindirilmemiş doku çöktüğünde, süpernatan içeren hücreleri toplayın ve bir miyelin ayırma tamponu ekleyin.
Hücreleri miyelin ve döküntülerden ayırmak için içeriği karıştırın ve santrifüjleyin. Miyelin kalıntı tabakasını ve süpernatanı çıkarın.
Kümeleri ayırmak için hücreleri tampon ve pipette yeniden askıya alın.
Kalan hücre agregalarını çıkarmak için süspansiyonu bir süzgeçten geçirin.
Filtrelenmiş hücreleri, mikrogliaya özgü monoklonal antikorlarla kaplanmış bir kültür plakasına aktarın. Mikroglia yapışmasını kolaylaştırmak için inkübe edin.
Yapışmayan hücreleri çıkarmak için tamponla yıkayın. Tripsin ekleyin ve mikroglia'yı gevşetmek için inkübe edin.
Tripsin çıkarın.
Serumsuz ortam ekleyin. Hücre-substrat etkileşimlerini zayıflatmak için buz üzerinde inkübe edin.
Süspansiyonu pipetleyin ve bir tüpte toplayın. Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın.
Mikroglia'yı serumsuz ortamda yeniden süspanse edin ve kollajen kaplı çok kuyulu bir plakaya aktarın. Mikroglia yapışmasını kolaylaştırmak için inkübe edin.
Büyüme
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin