NMDG Tabanlı Koruyucu Kurtarma Yöntemi Kullanılarak Beyin Bölümlerinin Hazırlanması

İzole edilmiş bir beyinle başlayın. Metabolik süreçleri duraklatmak için beyni hızla önceden soğutulmuş bir yapay beyin omurilik sıvısına veya aCSF'ye daldırın.

aCSF, nöronal hücre hasarını ve ölümünü azaltan büyük bir organik katyon olan NMDG içerir.

aCSF ayrıca pH ve tuz konsantrasyonunu koruyan ve hücre şişmesini ve hasarını önleyen HEPES içerir.

Beyni, bir filtre kağıdı içeren bir Petri kabına aktarın.

İstenilen bölgeyi elde etmek için beyni kesin.

Beyin bloğunu uygun bir yapıştırıcı kullanarak numune tutucuya sabitleyin ve agarozun içine gömün.

Numune tutucuyu dilimleyiciye yerleştirin.

Dilimleyicinin haznesini önceden soğutulmuş aCSF ile doldurun ve optimum oksijen kaynağı sağlamak için çözeltiyi havalandırın.

Beyin bloğunun bölümlerini elde edin.

Metabolik süreçleri yeniden başlatmak için bölümleri önceden ısıtılmış aCSF'ye aktarın ve bölümlerin iyileşmesini sağlayın.

Sağlam beyni, önceden soğutulmuş NMDG-HEPES aCSF'nin kabına nazikçe çıkarın ve beynin yaklaşık 1 dakika boyunca eşit şekilde soğumasına izin verin. Şimdi, beyni beherden filtre kağıdı ile kaplı Petri kabına aktarmak için büyük bir spatula kullanın.

Beyni, tercih edilen dilimleme açısına ve istenen beyin ilgi bö