JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 1:44 dk. • July 8th, 2025
Hücre yapışmasını kolaylaştırmak için bir hücre kültürü substratı ile kaplanmış bir kültür kabı alın.
Çanak, merkezine bağlı bir tabanı olmayan ve tanımlanmış bir bölme oluşturan tek kuyucuklu bir kültür eki içerir. Bu bölmenin ana hatları, hücre göçünü gözlemlemek için çanak üzerinde işaretlenmiştir.
Periventriküler endotel hücreleri veya PVEC'ler, beyindeki kan damarlarını kaplayan hücreler ve beyin gelişimi sırasında PVEC'ler boyunca göç eden internöronlar içeren bölmeye bir hücre süspansiyonu yerleştirin.
Nemi korumak için tabağa bir ko-kültür ortamı ekleyin ve hücrelerin alt tabakaya yapışmasını kolaylaştırmak için inkübe edin.
Fiziksel engeli ortadan kaldırmak için eki çıkarın; ortamı yenileyin ve tekrar inkübe edin.
PVEC'ler çoğalır ve endotel hücre ağını ek uç sınırının ötesine genişletir.
PVEC'ler, internöronları PVEC ağı boyunca göç etmeye yönlendiren kılavuz ipuçları olarak hareket eden faktörleri salgılar.
Nöronlar arası göçü sergileyen ko-kültür analiz için hazırdır.
Ko-kültür testini gerçekleştirmek için, 30.000 GABAerjik internöron ve 30.000 insan periventriküler endotel hücresini 70 mikrolitre ko-kültür ortamında askıya alın. Ardından, bu hücre çözeltisini tek oyuklu bir yerleştirme bölmesinin içine tohumlayın. 48 saat sonra ek parçayı çıkarın. Ko-kültürü beş gün boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin.