Tek Kullanımlık Biyoreaktörler Kullanılarak İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden Olgun Serebellar Organoidlerin Üretilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:46 dk. • July 8th, 2025
Bir biyoreaktörde insan kaynaklı pluripotent kök hücreleri veya iPSC'leri tohumlayın. iPSC'ler, hücresel apoptoz inhibitörü içeren bir ortamda yeniden süspanse edilir.
Manyetik bir alan altında, biyoreaktörün dikey tekerleği kontrollü bir hızda dönerek hücre-hücre temasını ve agrega oluşumunu kolaylaştırır. Ortamın çoğunu çıkarın ve inhibitör olmadan yeni ortam ekleyin.
Kültürlemeye devam edin. Agregalar en uygun boyuta ulaştığında, yerçekimi ile yerleşmelerine izin verin. Ortamı çıkarın.
Büyüme faktörleri içeren farklılaşma ortamı ekleyin ve azaltılmış biyoreaktör çark hızına sahip kültür ekleyin. Büyüme faktörleri, agregalar içinde nöral farklılaşmayı teşvik eder.
Daha sonra, serebellar progenitörlerin gelişimini indükleyen büyüme faktörleri ve kemokinlerle desteklenmiş taze ortam ekleyin.
Yavaş yavaş, serebellar progenitörler, agregalar içinde farklı katmanlar halinde organize olur ve erken serebellar organoidler oluşturur.
Son olarak, belirli nörotrofik faktörler içeren bir nöronal ortam ekleyin.
Bu faktörler, sinaptik olarak aktif fonksiyonel serebellar nöronlara serebellar progenitör olgunlaşmasını indükleyerek olgun organoidler oluşturur.
1. günde, 0. gün biyoreaktörün tohum
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin