Sıçan Serebellar Granül Nöron Kültüründen Mikroglia'nın Seçici Olarak Çıkarılması

Hasat edilmiş bir sıçan beyinciğini alın ve parçalara ayırın.

Parçaları tripsin içeren bir tüpe aktarın ve inkübe edin.

Tripsin, dokunun hücre dışı matrisini sindirerek serebellar granül nöronlarını ve ayrıca mikroglia ve astrositler gibi nöronal olmayan hücreleri gevşetir.

Bir tripsin inhibitörü ve DNaz içeren bir tampon ekleyin. İnhibitör, tripsini inaktive ederken, DNaz kirletici DNA'yı bozar.

Süpernatanı santrifüjleyin ve atın.

Dokuyu inhibitör ve DNaz içeren bir tampon içinde yeniden süspanse edin ve tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için mekanik olarak ayrıştırın.

Süspansiyonu protein içeren bir tampon çözeltisi üzerine yerleştirin.

Hücresel kalıntı içeren süpernatanı santrifüjleyin ve atın.

Hücreleri ortamdaki yeniden süspanse edin ve hücresel bağlanmayı kolaylaştırmak için poli-L-lizin kaplı lameller üzerine tohumlayın.

Ortamı çıkarın. Hücreleri taze ortamla yıkayın ve ardından glial hücre çoğalmasını önlemek için bir hücre döngüsü inhibitörü içeren ortam ekleyin.

Ortamın yarısını bir lizozom inhibitörü içeren yeni ortamla değiştirin.

İnhibitör seçici olarak mikroglia'yı hedef alır ve lizozomal membranları bozarak mikroglial ölüme ve kültürden çıkarılmasına neden olur.