Sıçan Beyninden Elde Edilen Glial Hücrelerin Üç Boyutlu Bir Kültürünün Oluşturulması

Bir sıçan beyninden türetilen yapışık bir glial hücre kültürüne sahip bir mikroplaka alın. Kültür, astrositler, mikroglia ve oligodendrositler içerir.

Ortamı çıkarın, hücreleri ayırmak için bir enzim çözeltisi ile inkübe edin ve ardından bunları bir tüpe aktarın.

Süpernatanı hücresel kalıntılarla santrifüjleyin ve çıkarın. Hücreleri ılık bir ortamda yeniden askıya alın.

Hücre kümelerini parçalamak için bir şırınga kullanarak ezin ve tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için bir süzgeç kullanarak süzün.

Fotoçapraz bağlanabilir bir biyopolimer, çapraz bağlama maddeleri ve hücre dışı matris bileşenleri ekleyin.

Karışımı bir lamel üzerine tutturulmuş bir kalıba dökün. Çapraz bağlanmayı indüklemek, bir jel oluşturmak ve glial hücreleri kapsüllemek için karışımı yüksek yoğunluklu ışığa maruz bırakın.

Kalıbı çıkarın ve lamelleri bir mikroplakaya yerleştirin. Sıcak bir ortam ekleyin ve jeli fizyolojik koşullar altında inkübe edin.

Hücreler, destekleyici hücre dışı matris içinde çoğalır ve üç boyutlu bir glial hücre kültürü oluşturarak hücresel bir ağ oluşturur.

Hücre kapsüllenmesinden 24 saat önce, ortamı iki haftalık birincil kültürlerden aspire edin ve her oyuğa 1 mililitre taze ortam