Sinaps Oluşumunu İndüklemek için Astrositlerin ve Nöronların 3D Ko-Kültür Kürelerinin Oluşturulması

Kuyu yüzey gerilimini azaltmak için bir yüzey aktif madde ile kaplanmış çok kuyulu bir plaka alın.

İstenilen astrosit ve nöron oranını uygun bir kültür ortamına ekleyin.

Hücreleri yerleştirmek için santrifüjleyin ve ardından inkübe edin.

Düşük yüzey gerilimi, hücrelerin kuyu yüzeyine yapışmasını önleyerek toplanmalarına neden olur.

Hücreler, yapışma molekülleri de dahil olmak üzere çeşitli zar etkileşimleri yoluyla birbirine yapışır ve bir 3D kokültür küresi oluşturur.

Küreleri toplayın ve bir tüpe aktarın.

Kürelerin yerleşmesine izin verin. Süpernatanı çıkarın ve taze kültür ortamı ekleyin.

Küreleri uygun bir büyüme ortamı içeren bir eğirme şişesine aktarın ve sürekli eğirme ile inkübe edin.

Kürede, nöronlar birbirlerine doğru çıkıntılar uzatarak sinaps adı verilen bir bağlantı oluştururken, astrosit sinapsa doğru uzanır ve nöronlarla yakın bir ilişki kurar.

İstenilen ayrışmış hAstros ve hNeuron veya iNeuron oranını, bir mikroplakanın her bir oyuğuna toplam iki mililitre hacimde ekleyin. Plakayı üç dakika boyunca 100 kez g'de santrifüjleyin ve iki gün boyunca inkübatöre geri dönün.

Bir gün sonra, plakada yoğun şekilde paketlenmiş mikro küreler oluşmuş olmalıdır. Mikro kuyulardan k