DRG Nöronlarının İzolasyonu ve Schwann Hücreleri Oluşturmak için Schwann Hücre Öncüleri ile Kokültür

Nöronlar ve glial hücreler içeren bağlı dorsal kök ganglionları veya DRG'leri olan bir sıçan embriyosunun omuriliğini alın.

Tek tek DRG'leri kablodan ayırın, bir tüpe aktarın ve doku kalıntılarını atarak santrifüjleyin.

DRG nöronlarını ve glial hücreleri ayırmak için enzimler ekleyin.

Hücreleri aşağı doğru döndürün ve kalıntıları temizleyin. Bir nöronal bakım ortamı ekleyin ve tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için ezin.

Süspansiyonu, hücre yapışmasını teşvik eden bir kültür substratı ile kaplanmış bir mikroplakaya aktarın.

Bir saflaştırma ortamı ekleyin ve inkübe edin. Ortamın inhibitör ajanları, bölünmeyen nöronlar hayatta kalırken bölünen glial hücreleri ortadan kaldırır.

Schwann hücresi benzeri hücreleri veya SCLC'leri bir ko-kültür ortamında alın. Schwann hücrelerinin öncüsü olan SCLC'ler, embriyonik periferik sinir nöronları ile etkileşime girer.

Süspansiyonu DRG nöronlarına yerleştirin ve inkübe edin. SCLC'lerin DRG nöronları ile etkileşimi, Schwann hücrelerine olgunlaşmalarını teşvik eder.

Üretilen Schwann hücreleri analiz için hazırdır.

Dorsal kök gangliyonlarını hasat etmek için, ilk embriyoyu yüzüstü pozisyonda diseksiyon mikroskobu altında oda sıcaklığında PBS içer