İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Türetilen Farklılaşmış Nöronların Yeniden Kaplanması

Yoğun bir nöronal ağa sahip insan pluripotent kök hücre türevli farklılaşmış nöronları içeren büyük bir kültür plakası ile başlayın.

Bu nöronları hafif proteolitik enzimlerle inkübe ederek plakadan ayırın ve bir tabaka olarak kaldırın.

Devam eden inkübasyon ile enzimler hücre bağlantılarını kısmen bozarak nöronal ağları gevşetir.

Enzim aktivitesini durdurmak için bir kültür ortamı ekleyin.

Ayrılan nöronları birbirinden ayırmak için tekrar tekrar pipetleyin.

Hücre kümelerini çıkarmak ve tek tek nöronları toplamak için nöronları bir hücre süzgecinden süzün.

Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Onları bir büyüme ortamında yeniden askıya alın.

Yeniden kaplama için, bu nöronları bir polimer ve yapışma proteini kaplı çok kuyulu bir plaka üzerine tohumlayın. Bağlanmalarına izin vermek için kuluçkaya yatırın.

Nöronlar, canlı kalabilmek için ortamdaki besinleri kullanır. Besin seviyelerini korumak için kültür ortamını düzenli olarak değiştirin.

Nöronal olgunlaşmaya ve aralarında bağlantı kurulmasına izin vermek için daha fazla kuluçkaya yatırın.

Farklılaşmış nöronların plakasını PBS ile nazikçe durulayarak başlayın. PBS'yi plakanın duvarından aşağı doğru dağıtın ve onları bozmamak için do