Mikroakışkan Çip Kullanarak İnsan iPSC'den Türetilmiş Motor Sinir Organoidlerinin Geliştirilmesi

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücreleri veya iPSC'leri, Rho-kinaz inhibitörleri ile besin açısından zengin bir kök hücre ortamında alın.

İnhibitörler hücrelere girer ve Rho-kinaz enzimlerini bloke ederek apoptotik hücre ölümünü önler.

Hücreler, çoğalmak için besinleri kullanır ve sferoid adı verilen üç boyutlu bir hücre kümesi oluşturmak için kendiliğinden toplanır.

Yavaş yavaş, ortamı bir nöral indüksiyon ortamı ile değiştirin. Ortamdan gelen sinyal modülatörleri, kök hücrelerin nöral hücrelere farklılaşmasını sağlar.

Küresel hücreleri motor nöronlara ayırmak ve bir motor nöron sferoidi veya MNS oluşturmak için büyüme faktörü açısından zengin bir nöral ortamla değiştirin.

Bu MNS'leri bir olgunlaşma ortamı içeren polimer kaplı bir mikroakışkan çipe aktarın.

Ortamdaki sinir büyüme faktörleri, aksonları veya nöronların daha uzun projeksiyonlarını sferoidden büyümeye ve çipin mikro kanalından geçmeye teşvik eder.

Bu, motor sinir dokusunun üç boyutlu bir modeli olan bir motor sinir organoidi oluşturur.

Motor nöronlara 3D iPS hücre farklılaşmasını indüklemek için, 10 mikrolitre besleyici ve 10 mikromolar Y27632 ile desteklenmiş serumsuz hücre kültürü ortamında 96 oyuklu bir U-alt plaka