Fare Embriyonik Kök Hücrelerinden Kortikal İnternöron Öncüllerinin Üretilmesi

Küçük moleküllü inhibitörler içeren serumsuz ortamda asılı fare embriyonik kök hücrelerini alın.

Hücreleri, yapışmayan bir kültür plakası üzerine tohumlayın, böylece üç boyutlu embriyoid cisimleri veya EB'ler oluşturmak için çoğalmalarına ve toplanmalarına izin verin.

Ek olarak, inhibitörler nöronal olmayan sinyal yollarını bloke eder ve kortikal bir nöral kadere doğru embriyonik kök hücre farklılaşmasını indükler.

EB'leri bir tüpe, santrifüje aktarın ve süpernatanı çıkarın.

EB'leri bir enzim kokteyli ve DNaz içeren bir çözelti içinde yeniden süspanse edin.

Enzimler, EB'leri tek hücrelere ayırırken, DNaz kirletici DNA'yı bozar.

Enzimatik aktiviteyi durdurmak için inhibitörler içeren serumsuz ortam ekleyin, ardından süpernatan içeren enzimleri santrifüjleyin ve çıkarın.

Hücreleri küçük moleküllü inhibitörler içeren ortamda yeniden süspanse edin ve bunları yapışma faktörleri ile kaplanmış kültür plakalarına aktarın.

Hücreler kaplanmış plaka yüzeyine yapışır.

İnhibitörler apoptotik hücre ölümünü önler ve kortikal internöron progenitörlerine hücresel farklılaşmayı indükler.

Yapışık olmayan doku kültürü kaplarında KSRN2 ortamına mililitrede 75.000 hücre ekleyerek hücreleri embriyoid cis