Asılı Damla Yöntemi ile Fare Embriyonik Kök Hücrelerinden Nöral Progenitörlerin Üretilmesi

Bir fare embriyonik kök hücre süspansiyonunu ele alalım.

Santrifüjleyin, süpernatanı çıkarın ve hücreleri bir nöral farklılaşma ortamında yeniden süspanse edin.

Süspansiyon damlacıklarını bir kültür plakası kapağının iç tarafına yerleştirin.

Damlacıkların kurumasını önlemek için alt plakaya bir tampon ekleyin. Kapağı alt plakaya yerleştirin, asılı bir damla kültürü oluşturun ve inkübe edin.

Yerçekimi nedeniyle, hücreler kümelenir ve embriyoid cisimler veya EB'ler olarak adlandırılan üç boyutlu kümeler oluşturur.

Damlacıkları farklılaşma ortamını içeren bir plakaya yerleştirin ve EB'lerin büyümesi için çalkalama altında inkübe edin.

Ortamı santrifüjleyin ve çıkarın; retinoik asit ile desteklenmiş farklılaşma ortamındaki EB'leri yeniden süspanse edin, bunları bir kültür plakasına aktarın ve inkübe edin.

Retinoik asit hücrelere girer ve bir transkripsiyon kompleksinin oluşumunu tetikler. Kompleks, nöral progenitör hücrelere farklılaşmayı tetikleyerek gen ekspresyonunu indükler.

Farklılaştırılmış EB'ler, aşağı akış uygulamaları için hazırdır.

Asılı damla hücre kültürünü kurarak başlayın. 10 santimetrelik bir hücre kültürü plakası için, konsantrasyonu 20 mikrolitre farklılaşma ortamı ba