Yetişkin İnsan Fibroblastlarından Türetilen İndüklenmiş Nöral Progenitör Hücre Kolonilerinin İzole Edilmesi

Laminin kaplı çok kuyucuklu bir plakada yetişkin insan fibroblastlarından türetilen indüklenmiş nöral progenitör hücre kolonilerinin yapışık bir kültürü ile başlayın.

Yapışmayan hücreleri çıkarmak için kolonileri bir tamponla yıkayın, ardından taze tampon ekleyin.

Çevreleyen hücreleri çıkarmak için tek tek kolonilerin etrafını kazıyın.

Kolonileri nöroindüksiyon ortamı içeren taze laminin kaplı kuyucuklara aktarın.

Tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için kolonileri mekanik olarak ayırın.

Hücre dışı bir matriks proteini olan laminin, progenitörlerin yüzey proteinleri ile etkileşime girerek hücrenin kuyu yüzeyine yapışmasını kolaylaştırır.

Hücrelere giren ve spesifik protein kinazları bloke ederek hücresel apoptozu önleyen küçük bir molekül inhibitörü ekleyin.

Nöroindüksiyon ortamında bulunan büyüme faktörleri ve küçük moleküller, progenitörlerin çoğalmasını kolaylaştırır.

Besinleri yenilemek için ortamı periyodik olarak değiştirin ve sürekli progenitör proliferasyonunu kolaylaştırın.

Birleştirilmiş bir kültür veya tamamen kaplanmış bir hücre tabakası, indüklenmiş nöral progenitör hücrelerin başarılı bir şekilde genişlediğini gösterir.

Bir gün sonra, plakalardan laminini aspire ed