JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:18 dk. • July 8th, 2025
Hücre dışı matriks protein kaplı çok kuyulu bir plaka üzerinde indüklenmiş nöral progenitör hücrelerin veya iNPC'lerin bir kültürünü alın.
Ortamı glial indüksiyon ortamı ile değiştirin ve inkübe edin. Ortamdaki büyüme faktörleri ve hormonlar, iNPC'nin glial öncü hücrelere farklılaşmasını kolaylaştırır.
Hücre çoğalması için ortamı gün aşırı değiştirin. Ardından, ortamı astrosit ortamı ile değiştirin ve inkübe edin.
Ortamdaki spesifik besinler ve büyüme faktörleri, glial öncü hücre farklılaşmasını astrositlere yönlendirir.
Her geçen gün medya değişiklikleri astrosit olgunlaşmasını teşvik eder.
Hücreler yaklaşık% 70 birleşim olduğunda ortamı nöro-diff-ortama değiştirin ve ortamı üç hafta boyunca her gün değiştirmeye devam edin. Farklılaşma sırasında hücreleri bölmeyin. Üç hafta sonra, hücreler nöronal belirteç TuJ1'i eksprese etmelidir.
Daha olgun nöronlar ve nöronal alt tipler kazanmak için, farklılaşmaya üç aya kadar devam edin. iNPC'lerin özellikle bir glial soya doğru farklılaşması için, glial öncü hücrelere farklılaşmayı indüklemek için ortamı mililitre epidermal büyüme faktörü başına 20 nanogram dahil olmak üzere glial indüksiyon ortamına değiştirin. Ortamın yarısını çıkarın ve yaklaşık iki hafta boyunca her gün yeni ortamla değiştirin.
Bu süre zarfında,% 100 birleşmeye ulaşıldığında 10 mikromolar Rho-kinaz inhibitörü varlığında hücreler 1 ila 3'e bölünmelidir. İki hafta sonra, hücreler neredeyse birleştiğinde ortamı ticari olarak temin edilebilen astrosit ortamına değiştirerek ve ortamı her iki günde bir değiştirmeye devam ederek hücreleri astrositlere daha fazla farklılaştırın. Yaklaşık yedi gün sonra, hücreler astrosit belirteçlerini ifade etmeye başlar.