İnsan Nöroblastom Hücre Hattının Olgun Nöronlara Farklılaşması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:08 dk. • July 8th, 2025
Yüksek serum konsantrasyonlu bir ortamda nöron benzeri ve epitel benzeri hücrelerden oluşan farklılaşmamış bir nöroblastom hücre hattı ile başlayın.
Ortamı çıkarın ve retinoik asit ile desteklenmiş, azaltılmış bir serum konsantrasyonu içeren bir farklılaşma ortamı ekleyin.
Serum yoksunluğu epitel benzeri hücre proliferasyonunu engeller.
Retinoik asit, nöron benzeri hücrelerde nöronal gen ekspresyonunu indükleyerek onları daha farklılaşmış bir fenotipe dönüştürür.
Kısmen farklılaşmış hücreleri ayırmak için bir tripsin-EDTA kokteyli ekleyin.
Tripsini bloke etmek için serum proteinleri içeren ortam ekleyin.
Hücreleri plakalayın ve retinoik asit içeren taze bir farklılaşma ortamı ve daha da azaltılmış serum seviyesi ekleyin.
Hücreler uzun süreçler geliştirmeye devam eder.
Hücreleri ayırmak için tripsin ekleyin.
Daha sonra, tripsini bloke etmek için ortam ekleyin ve hücresel yapışmayı teşvik etmek için hücreleri hücre dışı matris proteini kaplı bir tabak üzerine yerleştirin.
Son olarak, nöronal büyüme faktörleri içeren serumsuz ortam ile takviye edin.
Bu faktörler, geniş dallı nöritik süreçler sergileyen olgun nöronlara terminal farklılaşmasına neden olur.
Sıfırıncı günde, bir hemositom
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin