JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:15 dk. • July 8th, 2025
Besin açısından zengin bir bazal farklılaşma ortamında fare embriyonik kök hücresinden türetilmiş nöral progenitör hücreleri içeren jelatin kaplı çok kuyulu bir plaka ile başlayın.
Progenitör hücreler, canlılıklarını korumak için bu besinleri ortamdan kullanır.
Hücrenin jelatin kaplı yüzeye bağlanmasına izin vermek için inkübe edin, ardından bağlanmamış hücreleri ve kalıntıları çıkarmak için yıkayın.
Hücre farklılaşması için çok önemli olan stabilize edici bir ajan, ek besinler ve nöral büyüme faktörleri ile desteklenmiş bir bazal farklılaşma ortamı ekleyin ve ardından inkübe edin.
Progenitör hücreler, besinleri ve büyüme faktörlerini tüketerek, hücresel süreçlerini genişletmeye başlayan nöronlara farklılaşmalarını başlatır.
Aynı zamanda, stabilize edici ajan toksik metabolitlerle etkileşime girer ve gelişmekte olan nöronları oksidatif hasardan koruyarak canlılıklarını korur.
Besin seviyelerini korumak için ortamı düzenli olarak değiştirin.
Zamanla, nöronlar olgunlaşır, aksonlar geliştirir - daha uzun hücresel süreçler.
Ek olarak, kök hücrenin nöronlara farklılaşmasını doğrulayan daha kısa hücresel süreçler olan dendritler de geliştirirler.
Yaklaşık 500.000 fare embriyonik kök hücre türevini, oyuk başına 2 mililitre bazal farklılaşma ortamında% 0.1 jelatin kaplı plakalara tohumlayın. Üç faz II farklılaşma protokolünü test etmek için türevleri rastgele üç gruba ayırın. Plakayı altı saat inkübe edin. Daha sonra, hücreleri 2 mililitre PBS ile iki kez yıkayın ve protokole bağlı olarak her bir oyuğa 2 mililitre bazal farklılaşma ortamı, N2 B27 ortamı 1 veya N2 B27 ortamı 2 ekleyin. Plakaları inkübatöre yerleştirin ve hücrelerin 10 gün daha farklılaşmasına izin verin ve karşılık gelen ortamı her iki günde bir değiştirin.