JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:32 dk. • July 8th, 2025
Bir fibroblast ortamında süspanse edilen yetişkin insan dermal fibroblastlarını veya aHDF'leri hücre dışı matriks proteini kaplı bir mikroplakaya yerleştirin. Hücre yapışmasına izin vermek için inkübe edin.
Transgenik bir lentiviral vektörü tanıtın. Konak hücreye içselleştirildikten sonra, viral RNA, konakçı genomuna entegre olan DNA'ya ters kopyalanır.
Viral DNA, transkripsiyon faktörlerini ve kısa firkete RNA'larını veya shRNA'ları eksprese eder. Hücresel nükleazlar, shRNA'ları küçük enterferans yapan RNA'lara veya siRNA'lara dönüştürür.
Üretilen siRNA'lar, transkripsiyonel baskılayıcıları kodlayan mRNA'yı bozar, böylece ekspresyonlarını inhibe eder ve nöronal farklılaşma genlerinin aktivasyonunu sağlar.
Transkripsiyon faktörleri, aHDF'lerin nöronal farklılaşmasını teşvik ederek genleri aktive eder.
İçselleştirilmemiş vektörleri içeren ortamı çıkarın.
Nöron benzeri hücrelere farklılaşmayı indükleyen büyüme faktörleri ve küçük moleküller içeren erken bir nöronal dönüşüm ortamı ekleyin.
Ortamı, nöronlara olgunlaşma için nörotrofik faktörler içeren geç bir nöronal dönüşüm ortamı ile değiştirin.
Olgun nöronlar, aşağı akış tahlilleri için hazırdır.
Mililitre ortam başına 100.000 hücre
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin