İnsan Kan-Beyin Bariyerinin Üçlü Hücre Kültürü Modelinin Geliştirilmesi

Kuyu ekinin alt tarafına perisitler ekleyerek başlayın.

İyi eki bir kültür plakası ile örtün ve inkübe edin.

Perisitler, kuyu ekinin zarına yapışarak tek hücreli bir tabaka veya tek tabaka oluşturur.

Başka bir kültür plakası alın.

İnsan astrositlerini uygun bir ortamda kuyuya ekleyin. Ardından plakayı inkübe edin.

Astrositler kuyunun dibine yapışır ve tek tabaka oluşturur.

Ortamı atın ve taze astrosit ve perisit ortamı ekleyin.

Şimdi, perisit tabakası ile iyi eki içeren kültür plakasını alın.

Plakayı ters çevirin ve kuyu ekini astrosit tabakasını içeren kuyuya aktarın.

İnsan beyni endotel hücrelerini kuyu ekinin üst tarafına ekleyin ve inkübe edin.

Endotel hücreleri, kan dolaşımını ve beyni ayıran çok önemli bir arayüz olan kan-beyin bariyerine benzeyen üçlü bir hücre kültürü sistemi oluşturarak kuyu ekine bağlanır.

HBVP'yi, birleşene kadar 37 santigrat derecede% 5'lik bir karbondioksit inkübatörü içinde hücre yapışması için aktif bir yüzeye sahip T75 kültür şişelerinde yetiştirerek başlayın. Birleşme noktasına ulaşıldığında, eski parazit ortamını aspire edin ve hücreleri 5 mililitre ılık Dulbecco'nun PBS'si ile yıkayın. Dulbecco'nun PBS'sini aspire edin ve 4 mililitre ılık tripsin