Hipokampal Doku Örneklerinden Nöronların Ayrıştırılması ve Kültürlenmesi

Nöronlar ve çeşitli nöronal olmayan hücreler içeren hipokampal doku örnekleriyle başlayın.

Bir proteaz enzim çözeltisi ekleyin. Enzim, dokunun hücre dışı matrisini bozarak hücre ayrışmasını başlatır.

Artık enzimleri çıkarmak için bir kaplama ortamı ile yıkayın.

Hücreleri dokudan mekanik olarak ayırmak ve tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için sindirilmiş dokuyu tekrar tekrar pipetleyin.

Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Kaplama ortamındaki hücreleri yeniden süspanse edin.

Hücreleri, çok kuyulu bir plakada poli-D-lizin kaplı bir lamel üzerine tohumlayın. Lizin hücre bağlanmasını arttırır.

Kaplama ortamını, nöronun hayatta kalması için gerekli besinleri içeren bir nöron bakım ortamı ile değiştirin.

Ortamın yarısını arabinosilsitozin veya Ara-C içeren bakım ortamı ile yenileyin.

Ara-C hücrelere girer ve nöronal olmayan hücrelerin büyümesini seçici olarak inhibe ederek ölümlerine yol açar.

Nöronun hayatta kalmasını desteklemek için ortamı yeni bakım ortamıyla değiştirin.

Hipokampal nöronları kültür için ayırmak için proteaz enzim çözeltisini çözün ve kaplama ortamını 37 santigrat derecede önceden ısıtın. Daha sonra, disseke hipokampusu SLDS ile durulayın. Daha sonra çıkarın v