Hipokampal Doku Örneklerinden Nöronların Ayrıştırılması ve Kültürlenmesi

0 görüntüleme3:35 dk • July 8th, 2025

Nöronlar ve çeşitli nöronal olmayan hücreler içeren hipokampal doku örnekleriyle başlayın.

Bir proteaz enzim çözeltisi ekleyin. Enzim, dokunun hücre dışı matrisini bozarak hücre ayrışmasını başlatır.

Artık enzimleri çıkarmak için bir kaplama ortamı ile yıkayın.

Hücreleri dokudan mekanik olarak ayırmak ve tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için sindirilmiş dokuyu tekrar tekrar pipetleyin.

Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Kaplama ortamındaki hücreleri yeniden süspanse edin.

Hücreleri, çok kuyulu bir plakada poli-D-lizin kaplı bir lamel üzerine tohumlayın. Lizin hücre bağlanmasını arttırır.

Kaplama ortamını, nöronun hayatta kalması için gerekli besinleri içeren bir nöron bakım ortamı ile değiştirin.

Ortamın yarısını arabinosilsitozin veya Ara-C içeren bakım ortamı ile yenileyin.

Ara-C hücrelere girer ve nöronal olmayan hücrelerin büyümesini seçici olarak inhibe ederek ölümlerine yol açar.

Nöronun hayatta kalmasını desteklemek için ortamı yeni bakım ortamıyla değiştirin.

Hipokampal nöronları kültür için ayırmak için proteaz enzim çözeltisini çözün ve kaplama ortamını 37 santigrat derecede önceden ısıtın. Daha sonra, disseke hipokampusu SLDS ile durulayın. Daha sonra çıkarın ve 2 mililitre proteaz enzim çözeltisi ekleyin ve numuneyi 37 santigrat derecede 15 dakika inkübe edin.

Daha sonra, hipokampus eksplantlarını 5 ila 10 mililitre kaplama ortamı ile iki kez yıkayın ve 5 mililitre kaplama ortamı ekleyin. 1 mililitrelik plastik uçlu bir pipet kullanarak küçük bir girdap oluşturarak hipokampal eksplantları tek hücrelere ayırın. Çözelti bulanıklaşana ve büyük eksplant parçaları kalmayana kadar oksijen kabarcıklarının oluşmasını önleyerek yaklaşık 40 kez yukarı ve aşağı pipetleyin.

Daha sonra, hücreleri 3 dakika boyunca yerçekiminin 1.125 katı sıcaklıkta santrifüjleyin. Süpernatanı, ortama batırılmış hücrelerle çıkarın ve hücreleri 145 mililitre kaplama ortamında yeniden süspanse edin. Daha sonra, 24 oyuklu bir plakaya oyuk başına 1 mililitre hücre süspansiyonu ekleyin. Kaplama ortamındaki hücreleri 37 santigrat derecede iki ila dört saat inkübe edin.

Daha sonra, kaplama ortamını çıkarın ve yeni bakım ortamıyla değiştirin. İki gün sonra, fibroblastların, endotel ve glial hücrelerin büyümesini engellemek için ortamın yarısını bakım ortamında çözünmüş iki mikromolar Ara-C ile değiştirin. Ardından, hücreleri iki gün boyunca Ara-C'ye maruz bıraktıktan sonra, ortamı taze bakım ortamı ile değiştirin.

08:46

Membran proteinlerinin Yeşil floresan proteini temelli Ekspresyon elemesinde

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:02

Primer Nöronlarda Neurite Outgrowth Çalışma için Geliştirilmiş Yeşil Floresan Protein Tabanlı Test

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:20

Serebellar Granül Nöron Morfolojisi ve Sinaps Gelişimini Incelemek için In Vivo Postnatal Elektroporasyonun Kullanılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:18

P0 Yenidoğan Ratlarda Hipokampal Nöronlar İlköğretim Kültür

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:27

Prenatal Fareler gelen Hipokampal Nöronlar izolasyonu ve Kültürü

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:48

Fare Hipokampal Nöronlarını Kültürlemek İçin Bir Teknik

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:00

Bir Sıçan Hipokampusundan Çeşitli Nöral Hücre Popülasyonlarının Elde Edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:44

İskemik Hücre Ölümü Pathways Eğitim için seks Katmanlı Nöronal Kültürleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:19

Ultra Düşük Yoğunluk için Basitleştirilmiş Bir Yöntem, Uzun Vadeli İlköğretim Hipokampal Nöron Kültürü

İlgili videolar

0 Görüntüler

17:46

Düşük Yoğunluk İlköğretim Hipokampal Nöron Kültürü

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026