JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 3:35 dk • July 8th, 2025
Nöronlar ve çeşitli nöronal olmayan hücreler içeren hipokampal doku örnekleriyle başlayın.
Bir proteaz enzim çözeltisi ekleyin. Enzim, dokunun hücre dışı matrisini bozarak hücre ayrışmasını başlatır.
Artık enzimleri çıkarmak için bir kaplama ortamı ile yıkayın.
Hücreleri dokudan mekanik olarak ayırmak ve tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için sindirilmiş dokuyu tekrar tekrar pipetleyin.
Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Kaplama ortamındaki hücreleri yeniden süspanse edin.
Hücreleri, çok kuyulu bir plakada poli-D-lizin kaplı bir lamel üzerine tohumlayın. Lizin hücre bağlanmasını arttırır.
Kaplama ortamını, nöronun hayatta kalması için gerekli besinleri içeren bir nöron bakım ortamı ile değiştirin.
Ortamın yarısını arabinosilsitozin veya Ara-C içeren bakım ortamı ile yenileyin.
Ara-C hücrelere girer ve nöronal olmayan hücrelerin büyümesini seçici olarak inhibe ederek ölümlerine yol açar.
Nöronun hayatta kalmasını desteklemek için ortamı yeni bakım ortamıyla değiştirin.
Hipokampal nöronları kültür için ayırmak için proteaz enzim çözeltisini çözün ve kaplama ortamını 37 santigrat derecede önceden ısıtın. Daha sonra, disseke hipokampusu SLDS ile durulayın. Daha sonra çıkarın ve 2 mililitre proteaz enzim çözeltisi ekleyin ve numuneyi 37 santigrat derecede 15 dakika inkübe edin.
Daha sonra, hipokampus eksplantlarını 5 ila 10 mililitre kaplama ortamı ile iki kez yıkayın ve 5 mililitre kaplama ortamı ekleyin. 1 mililitrelik plastik uçlu bir pipet kullanarak küçük bir girdap oluşturarak hipokampal eksplantları tek hücrelere ayırın. Çözelti bulanıklaşana ve büyük eksplant parçaları kalmayana kadar oksijen kabarcıklarının oluşmasını önleyerek yaklaşık 40 kez yukarı ve aşağı pipetleyin.
Daha sonra, hücreleri 3 dakika boyunca yerçekiminin 1.125 katı sıcaklıkta santrifüjleyin. Süpernatanı, ortama batırılmış hücrelerle çıkarın ve hücreleri 145 mililitre kaplama ortamında yeniden süspanse edin. Daha sonra, 24 oyuklu bir plakaya oyuk başına 1 mililitre hücre süspansiyonu ekleyin. Kaplama ortamındaki hücreleri 37 santigrat derecede iki ila dört saat inkübe edin.
Daha sonra, kaplama ortamını çıkarın ve yeni bakım ortamıyla değiştirin. İki gün sonra, fibroblastların, endotel ve glial hücrelerin büyümesini engellemek için ortamın yarısını bakım ortamında çözünmüş iki mikromolar Ara-C ile değiştirin. Ardından, hücreleri iki gün boyunca Ara-C'ye maruz bıraktıktan sonra, ortamı taze bakım ortamı ile değiştirin.
Bu makale, kültürleme amacıyla doku örneklerinden hipokampal nöronların disosiye edilme sürecini detaylandırmaktadır. Makale, hücrelerin in vitro ortamda bakımı ve büyümesi için hazırlanmasında yer alan adımları özetlemektedir.
Hipokampal nöronların güvenilir şekilde disosyasyonu ve kültürü, erken aşama nörobilim ilaç keşifleri için standartlaştırılmış, nöron açısından zenginleştirilmiş in vitro sistemlerin oluşturulmasına olanak tanır. Bu kültürler, nöronal mekanizmaların incelenmesi için kontrollü bir platform sağlayarak hedef validasyonu ve mekanik risklerin azaltılmasında öngörülebilir güvenilirliği destekler. Yöntemin nöronal popülasyonlara yönelik seçiciliği, nörobiyoloji odaklı süreçlerde translasyonel sürekliliği ve portföy karar alma süreçlerini geliştirir.
Bu nöron disosyasyonu ve kültür protokolü, erken keşif ve analiz geliştirme süreçlerinin kesişim noktasında yer alarak, sonraki tarama ve mekanistik çalışmalar için temel sistemler sağlar.
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
İlgili videolar
0 Görüntüler
Son güncelleme: 29 Ağustos 2026