JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 2:26 dk. • July 8th, 2025
Hücre dışı bir matris üzerinde kültürlenmiş insan kaynaklı nöronları veya iN'leri alın.
Ortamı çıkarın ve matrisi bozan, hücreleri ayıran sindirim enzimleri ekleyin.
iN'leri bir tüpe aktarın. Süspansiyonu santrifüjleyin ve enzimleri içeren süpernatanı atın.
iN'leri bir ko-kültür ortamında yeniden süspanse edin; bunları indüklenmiş oligodendrosit öncü hücrelerinin veya iOPC'lerin bir kültürüne aktarın.
iOPC'ler, nöronların aksonları etrafında miyelin kılıfları oluşturan oligodendrositlerin öncüleridir.
Kuluçka üzerine, iOPC'ler iN'lerle sinaptik bağlantılar oluşturur. Ortamdaki iOPC'ler ve büyüme faktörleri tarafından salınan trofik faktörler, diğer nöronlarla sinaptik bağlantılar oluşturan artan hücresel süreçler sergileyerek nöronlara iN olgunlaşmasını teşvik eder.
Ortamdaki olgun nöronların ve büyüme faktörlerinin elektriksel aktivitesi, oligodendrositlere iOPC olgunlaşmasını indükler.
Oligodendrositler, nöronal aksonların etrafında miyelin kılıfları oluşturarak hücresel süreçleri uzatır.
Kurulan ortak kültür analize hazırdır.
14. günde, OPC farklılaşma ortamında 24 oyuklu bir plakada oyuk başına 1 x 105 hücre yoğunluğunda plaka iOPC'leri. Ertesi gün, indüklenen insan nöronlarını hücre ayırma çözeltisi ile ayırın. Kültürlenmiş OPC'lerin üzerine nöronlar ekleyin, oyuk başına 2 x 105 hücre oturma yoğunluğunda kaplayın. Nörobazal A-ortamı,% 2 B-27 Takviyesi ve mililitre T3 triiyodotironin başına 100 nanogram içeren ko-kültür ortamı kullanın. Ortamı ertesi gün ve ardından her gün değiştirin. OPC'ler çok hızlı çoğalır ve üç günden daha kısa sürede birleşirse, 2 ila 5 mikromolar Ara-C ekleyin.