İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Embriyoid Cisimlerden Nöronlar ve Glial Hücreler Üretilmesi

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden türetilen embriyoid cisimcikleri veya EB'leri ele alalım. Bu EB'ler üç germ katmanından oluşur.

EB'leri uygun bir ortam içeren matris kaplı bir kültür kabına aktarın ve inkübe edin.

Matris, EB'lerin kültür kabına yapışmasını sağlar.

Ortamdaki büyüme faktörleri ve besinler, EB'lerin ektodermal hücrelerinin, rozet adı verilen dairesel bir düzende düzenlenmiş nöroepitelyal agregatlar oluşturmasını kolaylaştırır.

Rozet parçalarını kesin ve tabaktan ayırın.

Parçaları toplayın ve döndürün.

Süpernatanı atın ve parçaları yeniden askıya alın.

Bir pipet kullanarak, parçaları ayırmak için yukarı ve aşağı hareket ettirin.

İstenilen sayıda hücreyi, bir farklılaşma ortamı içeren matris kaplı bir kuyu plakasına ekleyin.

Farklılaşma ortamının bileşenleri, nöroepitel hücrelerinin, sinir sisteminin birincil hücreleri olan tamamen işlevsel nöronal ve glial hücrelere dönüşmesini kolaylaştırır.

İkinci günde, önceden hazırlanmış 60 mililitrelik bir tabaktan standart matris kaplama solüsyonunu aspire edin ve tabağa 5 mililitre tam nöroepitelyal indüksiyon ortamı veya NRI ekleyin. Stereoskopik mikroskop altında 4x büyütmede ve 200 mikrolitrelik bir pipet kullanar