Omurilik Nöral Progenitör Hücrelerinin Motor Nöronlara Farklılaşması

Sentetik bir polimer ve bir yapışma proteini ile kaplanmış bir kültür plakası ile başlayın.

Küçük moleküllü bir inhibitör ile desteklenmiş bir motor nöron farklılaşma ortamında yeniden süspanse edilmiş omurilik nöral progenitör hücreleri ekleyin.

Kaplanmış plaka yüzeyi hücre yapışmasını kolaylaştırır.

Küçük moleküllü inhibitör, spesifik protein kinazları bloke ederek hücresel apoptozu önler.

Harcanan ortamı çıkarın ve yeni farklılaştırma ortamı ekleyin.

Besiyeri, motor nöron progenitörlerine nöral progenitör farklılaşmasını destekleyen bir bileşik içerir.

Ek olarak, glial kararlı atalar ortaya çıkar.

Daha sonra, bir DNA sentezi inhibitörü ile desteklenmiş farklılaşma ortamı ile değiştirin.

Bu inhibitörler, glial progenitörlerde seçici olarak DNA hasarına ve ölüme neden olurken, motor nöron progenitörleri olgun nöronlara farklılaşır.

Hücreleri tamponla yıkayın ve nöronları korumak için farklılaşma ortamını inhibitörler olmadan ekleyin.

Kültür sırasında, besinleri yenilemek için ortamı düzenli olarak değiştirin.

Ek olarak, homojen bir motor nöron kültürü oluşturarak nöronal bağlanmayı artırmak için ortamı adezyon proteini ile takviye edilmiş ortamla değiştirin.

Nöral progenitör hücre kültürleri donmuşsa, onları çözün. El yazmasında tarif edildiği gibi ortam değişimi ve PBS durulamasından sonra, ortamı 0.02 mikromolar sitozin arabinosit içeren bir motor nöron farklılaşma ortamı ile değiştirin.

Daha sonra, glial taahhütlü progenitörler, hücre kümelerinde toplanan post-mitotik motor nöron progenitörleri altında tek çoğalan düz hücreler olarak ortaya çıktığında, hücreleri 37 santigrat derecede ve% 5 karbondioksitte 48 saat boyunca inkübe edin. Daha sonra, el yazmasında belirtildiği gibi orta değişim gerçekleştirin.