JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:34 dk. • July 8th, 2025
Fare yavrusu cerebella'yı ele alalım.
Onları daha küçük parçalar halinde homojenize edin.
Dokunun hücre dışı matrisini sindirmek, serebellar granüler progenitörleri veya CGNP'leri ve astrositleri gevşetmek için bir proteolitik enzim ekleyin.
Enzimatik aktiviteyi durdurmak için serum içeren CGNP kültür ortamı ekleyin. Enzim açısından zengin süpernatanı santrifüjleyin ve atın.
Doku parçalarını CGNP ortamında yeniden süspanse edin. Hücreleri serbest bırakmak için dokuyu mekanik olarak ayırın.
Kalıntı çöktüğünde, hücreleri içeren süpernatanı yeni bir tüpe aktarın.
Süpernatanı santrifüjleyin ve döküntülerle çıkarın.
Hücreleri CGNP ortamında yeniden süspanse edin ve bunları poli-D-lizin ile kaplanmış çok kuyulu plaka kuyucuklarına tohumlayın. Kuluçkaya yatmak.
Astrositler, CGNP'lere kıyasla poli-D-lizin kaplamaya güçlü bir şekilde yerleşir ve yapışır.
Plakayı sallayın ve CGNP içeren süpernatanı toplayın. Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın.
CGNP'leri CGNP ortamında yeniden süspanse edin ve bunları poli-L-ornitin kaplı çok kuyulu bir plakaya yerleştirin. Kuluçkaya yatmak.
CGNP'ler kaplanmış yüzeye yapışır ve medya bileşenleri ve poli-L-ornitin tarafından desteklenerek çoğalır.
Üç ila be
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin