JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:00 dk. • July 8th, 2025
Bir kültür ortamında uygun bir substrata bağlı insan pluripotent kök hücre kolonileri veya hPSC'ler ile başlayın.
Ortamı çıkarın. Spesifik inhibitörler içeren bir nöronal ortam ekleyin ve inkübe edin.
Bu inhibitörler, hPSC'lerin olgunlaşmasını nöroektodermal koloniler oluşturan bir nöronal soya doğru yönlendirir. Bunlar, sferoid adı verilen küçük, küresel yapıların öncüleridir.
Ortamı çıkarın ve bir tuz tamponu ile yıkayın.
Kolonileri plakadan ayırmak için bir sindirim enzimi ile inkübe edin.
Enzimatik aktiviteyi durdurmak için nöronal ortamı ekleyin.
Kolonileri toplayın ve bir tüpe aktarın.
Yerleşmelerine izin verin ve ardından süpernatanı atın.
Kolonileri bir büyüme faktörü içeren nöronal bir ortamda yeniden askıya alın.
Kolonileri çok kuyulu bir plakaya aktarın ve inkübe edin.
Bu büyüme faktörü, nöroektodermal hücrelerin kendi kendine organizasyonunu ve çoğalmasını kolaylaştırarak onları bir sferoid oluşturmaya yönlendirir.
Başlamak için, hPSC kolonilerini, %20 ila %30 yoğunluk elde etmek için %60 birleşimde 6 oyuklu bir plakanın bir oyuğundan üç oyuğa hESC nitelikli bir bazal membran matrisi üzerinde plakalayın ve ardından 2D nöroektodermal kolonilerin indüksiyonu ile devam edi
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin