Diş Germi ve Trigeminal Gangliyon Etkileşimlerinin Mikroakışkan Ko-Kültür Sistemi Kullanılarak Analiz Edilmesi

Sentetik bir polimer ve bir yapışma proteini ile kaplanmış bir mikroakışkan cihaz alın.

Cihaz, mikro oluklarla ayrılmış kuyulardan ve birbirine bağlı kültür odalarından oluşur.

Odalar, doku yerleştirme için delinmiş delikler içerir.

Trigeminal nöron hücre gövdelerinin bir koleksiyonu olan trigeminal gangliyonları ve yetişkin dişlerine dönüşen doğum öncesi yapılar olan diş mikroplarını bir fare embriyosundan elde edin.

Dokuları deliklere yerleştirin ve ilgili kültür ortamını ekleyin.

Diş germ ortamındaki besinler ve vitaminler, kültür sırasında diş germinin hayatta kalmasını kolaylaştırır.

Trigeminal gangliyon ortamındaki kaplanmış cihaz yüzeyi ve büyüme faktörleri, nörit ve aksonal büyümeyi kolaylaştırır.

Aksonlar, mikro oluklar yoluyla diş germ odasına ulaşır.

Dişten türetilen sinyaller nöronal itmeye yol açar ve aksonların diş mikrobunu innerve etmeden çevrelemesine izin verir.

Kültür odalarını tampon ile yıkayın ve dokuları bir fiksatif ile sabitleyin.

Ortak kültür artık daha fazla analiz için hazır.

Trigeminal gangliyonların ve diş mikroplarının diseksiyonundan sonra, laminini mikroakışkan cihazlardan çıkarın ve odaları ilgili ortamın 200 mikrolitresi ile doldurun. Forseps ile, diseke edilmiş trigeminal gangliyonları ve diş mikroplarını biyopsi zımbası ile oluşturulan deliklere nazikçe aktarın. Diş mikroplarının yüzmediğinden ve lamellerle temas edene kadar battığından emin olun.

Numuneleri bir inkübatörde 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte kültürleyin. Kültür ortamını 10 gün boyunca her 48 saatte bir değiştirin. Ortamı değiştirmek için önce pipeti kuyucukların dış tarafına doğru tutarak ortamı çıkarın. Ardından, odacıkların karşısında bulunan kuyucukların yan tarafına önceden ısıtılmış taze ortamı ekleyin.

Kültür dönemi boyunca, ışık mikroskobu kullanarak herhangi bir zamanda ortak kültürleri görüntüleyin. Kültür süresinden sonra, hazne başına bir oyuğa 150 mikrolitre PBS pipetleyerek ve PBS'nin haznelerden akmasına izin vererek hazneleri yıkayın. Yıkamayı toplam üç kez tekrarlayın.

Son yıkamanın ardından, PBS'yi çıkarın ve PBS'deki 150 mikrolitre %4 paraformaldehiti hazne başına bir oyuka pipetleyerek ve diğer hazneye akmasına izin vererek numuneleri sabitleyin. Cihazı oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. Daha sonra, odaları PBS ile iki kez yıkayın ve immünofloresan boyama ve büyümenin görüntülenmesi gibi daha ileri analizlere devam edin.