Bölümlere Ayrılmış Bir Mikroakışkan Cihaz Kullanılarak Nöral Kök Hücrelerin Nöronlara Farklılaşması

Bir mikro oluk bariyeri ile ayrılmış, somatik ve aksonal olmak üzere iki bölmeye bağlı rezervuar kuyularından oluşan bir mikroakışkan cihazı alın.

Bölmeler ve mikro oluklar, hücre yapışmasını kolaylaştırmak için bir hücre kültürü substratı ile kaplanmıştır.

Her oyuğa bir nöral kök hücre ortamı ekleyin ve cihazı hücre kültürü için ön koşullandırmak üzere inkübe edin.

Medyayı atın. Somatik bölmenin kuyularına nöral kök hücreleri veya NSC'leri ekleyin ve hücrelerin yapışmasına izin verin.

NSC ortamını her bir oyuğa ekleyin ve ortamın buharlaşmasını önlemek için nemlendirilmiş bir odada inkübe edin. Kuluçka sırasında, NSC'ler çoğalır.

NSC ortamını bir nöral farklılaşma ortamı ile değiştirin ve inkübe edin.

Ortamdaki küçük moleküller, NSC'lerin somatik bölme içindeki nöronlara farklılaşmasına neden olur ve aksonları mikro oluklardan aksonal bölmeye uzanır.

Genişletilmiş aksonlara sahip farklılaşmış nöronlar daha ileri tahliller için hazırdır.

Başlamak için, çip başına 600 mikrolitre çözelti yapmak için poli-l-ornitini hücre kültürü dereceli damıtılmış suda çözün. Pipet ucunun kanal açıklığından uzakta olduğundan emin olarak kalan PBS'yi kuyulardan aspire edin. Sağ üst kuyuya 150 mikroli