JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:24 dk. • July 8th, 2025
Bir farenin retinasını, retinal ganglion nöronlarını veya RGN'leri içeren ışığa duyarlı bir göz tabakasını ele alalım.
Doku hasarını önlemek için retinayı soğuk dengelenmiş bir tuz çözeltisine yerleştirin.
Retinayı proteaz ve DNaz içeren bir çözeltiye aktarın ve daha küçük parçalar halinde kesin.
İçeriği bir tüpe aktarın ve inkübe edin.
Proteaz, hücre dışı matrisi parçalar ve hücreleri gevşetirken, DNaz herhangi bir kirletici DNA'yı bozar.
Hücre kümelerini dağıtmak için yukarı ve aşağı pipetleyin.
Proteaz etkisini durdurmak için bir inhibitör solüsyonu ekleyin.
Hücreleri yerleştirmek için santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve hücreleri uygun bir büyüme ortamında yeniden süspanse edin.
Bu hücre süspansiyonunu, bir tür glial hücre olan koku alma kılıfı glia veya OEG hücrelerinin tek tabakasına ekleyin ve inkübe edin.
RGN'ler, OEG'lerin nörorejeneratif potansiyelini değerlendirmek için kokültür modelini oluşturarak OEG tek katmanına entegre olur.
Retinayı 5 mililitre soğuk EBSS ile önceden hazırlanmış bir P-60 hücre kültürü kabına yerleştirin. Daha sonra, sulandırılmış papain artı 50 mikrolitre APV ve 250 mikrolitre DNase artı 5 mikrolitre APV içeren P-60 hücre kültürü kabına aktarın
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin