JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:27 dk. • July 8th, 2025
Bir büyüme ortamında birincil oligodendrosit öncü hücrelerinin veya OPC'lerin yapışık kültürlerini alın.
Kontrol kuyusuna kontrol lentiviral vektörleri ekleyin ve miyelinleşmeyi düzenleyen sinyal proteinlerini kodlayan test vektörlerini test kuyusuna ekleyin, ardından inkübe edin.
Hücreler vektörleri içselleştirir ve viral RNA, DNA'ya ters kopyalanır ve konakçı genomuna dahil edilir, bu da test hücrelerindeki sinyal proteinlerini ifade eder.
OPC'leri substrattan ayırmak için enzimleri tanıtın.
Enzimleri nötralize edin ve enzimleri çıkarmak için santrifüjleyin.
Büyüme ortamını ekleyin ve OPC'leri, yapışmış dorsal kök ganglionu veya DRG nöronları olan bir mikroplaka içindeki lamellere aktarın. OPC'lerin yerleşmesine izin verin.
Kuyuları büyüme ortamı ile doldurun ve inkübe edin. DRG nöronları ile etkileşim, OPC'nin oligodendrositlere olgunlaşmasını tetikler.
İfade edilen sinyal proteinleri, oligodendrositleri DRG nöronları etrafında miyelin kılıfları oluşturmaya indükler.
Kontrol vektörü ile transdüksiyonlu hücrelere kıyasla test hücrelerinde sinyal proteininin neden olduğu miyelin kılıf oluşumunu değerlendirin.
Bu protokol için, aşağıdaki büyüme faktörlerini içeren 10 mililitre SATO
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin