Murin Beyninden Floresan Etiketli Nöronların İzole Edilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:35 dk. • July 8th, 2025
Floresan protein eksprese eden nöronlar içeren transgenik bir fare korteksi alın.
Bir numune tutucuya sabitleyin.
Dokunun fizyolojik koşullarını korumak için tutucuyu oksijenli aCSF içeren vibratom tepsisine monte edin.
Ayarlanan parametreleri kullanarak koronal dilimler elde edin.
Dilimleri, stabilize etmek için oksijenli aCSF ve aktivite blokerleri içeren gözenekli bir tutucuya yerleştirin.
Hücre dışı matrisi sindirmek ve hücreleri gevşetmek için dilimleri proteazlarla muamele edin.
Proteazları çıkarmak için aCSF ile yıkayın.
Dilimleri aCSF ve serum içeren bir kültür plakasına aktarın.
Bir floresan mikroskobu altında, floresan nöronlar içeren dilim bölgelerini inceleyin.
Diseke edilen parçaları aCSF ve serum içeren bir tüpe aktarın.
Tek hücreli bir süspansiyon oluşturmak için dokuyu mekanik olarak ayırın. Hücreleri aCSF içeren bir kültür plakasına aktarın.
Floresan mikroskobu altında, floresan nöronları toplamak için bir kılcal pipet kullanın.
Daha fazla analiz için bu nöronları aCSF içeren bir kültür plakasına dağıtın.
Kafatasını küçük bir makasla açarak ve kortekse zarar vermeden ince forseps kullanarak taze beyni çıkararak ötenazi yapılmış bir fareden beyni inceleyin. Beyni so
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin