Fare Yavrusu Beyin Korteksinden Oligodendrosit Öncü Hücrelerinin İzole Edilmesi ve Kültürlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:39 dk. • July 8th, 2025
Bir fare yavrusu korteksi alın.
Dokunun hücre dışı matrisini sindiren proteolitik bir enzim ekleyin. Daha sonra, hücreleri gevşeterek dokuyu mekanik olarak ayırın.
Kirletici DNA'yı parçalamak için glial ortam ve DNaz ekleyin.
Nöronları ve glial hücreleri serbest bırakmak için dokuyu mekanik olarak ayırın.
Sindirilmemiş doku çöktüğünde, hücreleri ve santrifüjü içeren ortamı toplayın. Süpernatanı çıkarın.
Glia ortamındaki hücreleri yeniden süspanse edin ve bunları hücre dışı matriks protein kaplı bir şişe üzerine yerleştirin.
Kuluçkaya yatmak. Astrositler, kaplanmış yüzeye diğer hücrelere göre daha güçlü bir şekilde yapışır. Glial media sadece glial hücre sağkalımını destekler.
Kalıntıları temizlemek için ortamı değiştirin.
Üstteki oligodendrosit öncü hücrelerini, OPC'leri ve mikroglia'yı ayırmak için çalkalama ile inkübe edin.
Ortamı hücrelerle birlikte bir kültür plakasına aktarın.
Diferansiyel mikroglial yapışmayı kolaylaştırmak için çalkalama ile inkübe edin.
Yapışmayan OPC süpernatanı poli-D-lizin kaplı çok kuyulu bir plakaya aktarın. OPC uyumu için kuluçkaya yatırın.
Medyayı OPC medyasıyla değiştirerek OPC'nin büyümesine izin verin.
Doku ile her tüpe 0.53 milimolar EDTA ile 1 m
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin