İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinden Beyin Organoidleri Üretme Tekniği

Destekleyici bir matris üzerinde kültürlenmiş insan embriyonik kök hücrelerinin veya hESC'lerin kolonilerini alın.

Ortamı aspire edin ve matrisi bozan enzimler ekleyin.

Enzimleri çıkarmak için yıkayın. Ardından, gevşemiş kolonileri çıkarmak için bir ortam ve pipet ekleyin ve onları daha küçük kümelere ayırın.

Kümeleri taze bir ortama aktarın ve inkübe edin, böylece kümelerin küresel agregalar oluşturmasına izin verin.

Kürelerin yerleşmesine ve ölü hücreleri çıkarmasına izin verin.

Hücre proliferasyonu için bazik fibroblast büyüme faktörü veya bFGF içeren bir ortamla inkübe edin.

Hücre farklılaşmasını kolaylaştırmak için kademeli olarak azalan bFGF konsantrasyonları içeren ortamlarla doldurun.

nöral kök hücrelere veya NSC'lere hESC farklılaşmasını teşvik eden, küreleri nöral rozet benzeri bir yapı sergileyen organoidlere dönüştüren bir nöral indüksiyon ortamı tanıtın.

Uzun süreli kültür sırasında herhangi bir kontamine mikropların büyümesini önlemek için antibiyotik ekleyin.

NSC'ler nöronlara ve glialara farklılaşır ve organoidleri aşamalı olarak bir beyin korteksine benzeyen karmaşık bir yapıya dönüştürür.

Her 6 oyuklu hESC plakası için 5 mililitre DMEM veya F12 ortamına 1 mililitr