JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 7:57 dk. • July 8th, 2025
Transgenik bir hamile fareyi alın ve floresan etiketli motor nöronlar içeren embriyolarla uterusu cerrahi olarak çıkarın.
Uterusu floresan mikroskobu altında buz gibi soğuk bir tampon içeren bir tabağa aktarın.
Embriyoları izole etmek için görünür ışık kullanın.
Embriyoların yüzünü ve kuyruğunu çıkarın ve yüzüstü pozisyona getirin.
Floresan sinyalini kullanarak, motor nöronları içeren okülomotor ve troklear çekirdekleri ortaya çıkarmak için orta beyinde bir kesi yapın.
Çekirdeği içeren orta beyni izole edin.
Arka beyin ve omuriliğin sırt tarafını açın. Omuriliği izole edin, her iki ucunu da eksize edin ve spinal motor nöronları içeren sütunları toplayın.
Doku matrisini ayırmak için toplanan dokuları enzimlerle tedavi edin. Tek hücreleri hasat edin ve FACS kullanarak floresan etiketli nöronları izole edin.
İzole edilen nöronlara bir kültür ortamı ekleyin, hücreleri kültür substratı kaplı bir mikroplaka üzerine aktarın ve hücrelerin yapışmasına ve büyümesine izin vererek inkübe edin.
Kültürdeki motor nöronları koruyun.
Döllenmeden yaklaşık 11.5 gün sonra hamile bir fareden Islet-1 EGF pozitif embriyoları toplayarak başlayın. Karnı etanol ile iyice püskürtün ve uterusu steril mikrodis
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin