Manyetik Aktive Hücre Sıralaması Kullanılarak CD31+ Endotelyal Öncü Hücrelerin Saflaştırılması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:32 dk. • July 8th, 2025
Beyin mikrovasküler endotel hücrelerinin öncüleri olan endotelyal progenitör hücrelerin veya EPC'lerin yapışık bir kültürünü alın.
Pluripotent kök hücrelerin ayırt edilmesiyle elde edilen kültür, yüzey belirteci CD31 için pozitif EPC'leri ve kontamine CD31 negatif hücreleri içerir.
Hücreleri ayırmak için bir ayrışma reaktifi ile inkübe edin ve tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için süzün.
Enzimleri nötralize etmek için bir ortam ekleyin, süpernatanı atmak için santrifüjleyin ve hücreleri bir tamponda yeniden süspanse edin.
Hücresel Fc reseptörlerini inhibe etmek için bir bloke edici reaktif ile inkübe edin ve spesifik olmayan etiketlemeyi önleyin.
CD31 için spesifik bir florofor konjuge antikor ekleyin ve EPC'leri etiketlemek için inkübe edin.
Bağlanmamış antikorları santrifüjleyin ve atın. Floroforlara bağlanan bir antikor içeren antikor kompleksleri ile inkübe edin.
Polimer kaplı manyetik nanopartikülleri tanıtın ve inkübe edin, nanopartiküllerin komplekslerin ikinci antikoruna bağlanmasına izin verin.
Bir manyetik alan kullanarak, nanoparçacığa bağlı hücreleri izole edin.
Süspansiyonu etiketlenmemiş CD31 negatif hücrelerle atın ve saflaştırılmış hücreleri bir ortamda yenide
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin