Murin Periaortik Yağ Dokusundan Yağ Kaynaklı Kök Hücrelerin İzole Edilmesi

0 görüntüleme3:52 dk • July 8th, 2025

Nöral krest hücrelerinden veya NCC'lerden türeyen floresan protein eksprese eden adipoz türevi kök hücreler içeren hasat edilmiş transgenik fare periaortik yağ dokularını alın.

Sindirim ortamı ekleyin ve dokuları kıyın.

Kıyılmış dokuyu sindirim ortamı ile bir tüpe aktarın. Parçaları mekanik olarak ayırın.

Kuluçkaya yatmak. Ortamdaki kollajenaz, dokunun hücre dışı matrisini sindirerek kök hücreleri, adipositleri ve fibroblastları serbest bırakır.

Kollajenaz aktivitesini durdurmak için serum içeren ortam ekleyin. Süpernatan içeren adipositleri santrifüjleyin ve atın.

Ortamdaki hücreleri yeniden askıya alın ve agregaları çıkarmak için filtreleyin.

Süzüntüyü santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. Eritrositleri parçalamak için eritrosit lizis tamponundaki hücreleri yeniden süspanse edin.

Lizizi durdurmak için serum içeren tampon ekleyin. Süpernatanı santrifüjleyin ve atın.

Tampondaki hücreleri yeniden askıya alın.

Floresan kök hücreleri izole etmek için floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması yapın.

İzole edilen kök hücreler daha ileri deneyler için kullanılabilir.

Hasat edilen yağ dokusunu, 1 mililitre taze hazırlanmış sindirim ortamı içeren yeni bir 2 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne aktarın ve dokuları kıymak için cerrahi makas kullanın. Doku bulamacını 9 mililitre taze sindirim ortamı içeren 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve dokuları 10 kez ezmek için 1 mililitrelik bir pipet kullanın.

Homojen bir çözelti elde edildiğinde, tüpü 37 santigrat derecede ve dakikada 100 devirde 30 ila 45 dakika inkübe edin ve aşırı sindirimi önlemek için her 5 ila 10 dakikada bir kontrol edin. Tüpün hafifçe döndürülmesi üzerine açık sarı homojen bir yağ dokusu çözeltisi gözlendiğinde,% 10 fetal sığır serumu ile desteklenmiş 5 mililitre HDMEM ile sindirimi durdurun. İyice karıştırdıktan sonra, yağ dokusu örneğini santrifüjleyin.

Stromal vasküler hücre fraksiyonu kahverengimsi bir topak olarak görünecektir. Peleti 10 mililitre kültür ortamında yeniden süspanse edin ve hücre süspansiyonunu 70 mikrometrelik bir hücre süzgecinden süzün.

Hücreleri başka bir santrifüjleme ile toplayın ve peleti 5 mililitre eritrosit lizis tamponunda nazikçe yeniden süspanse edin. Süspansiyonu 15 milimetrelik bir tüpe aktarın. 10 dakika sonra,% 1 fetal sığır serumu ile desteklenmiş 10 mililitre PBS'de iki santrifüjleme ile reaksiyonu durdurun.

İkinci santrifüjlemeden sonra, peleti buz üzerinde 5 mililitre kültür ortamında yeniden süspanse edin ve hücreleri son bir santrifüjleme ile toplayın. Ardından, hücreleri saymak için 5 mililitre FACS tamponunda yeniden askıya alın.

Standart protokollere göre FACS tarafından izole edildikten sonra bir NCADSC kültürü kurmak için, hücreleri her bir oyuğa cm başına 5 x 103 hücre2 konsantrasyonuna, tam kültür ortamında 12 oyuklu bir kültür plakasına, 37 santigrat dereceye ve 20 ila 24 saat boyunca% 5 karbondioksite yerleştirin. Ertesi gün, hücreleri 37 Santigrat PBS ile yıkayın ve kültürü taze kültür ortamı ile besleyin.

09:20

Domuz Subkutan yağ dokularındaki İzolasyonu ve Yağ-Türetilmiş Kök Hücre Farklılaşması

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:33

Rhesus Macaque Adipoz Türevi Kök Hücrelerin İzolasyonu, Proliferasyonu ve Farklılaşması

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:00

İnsan Tedavisi için Yenilikçi Bir Ksenojenik İçermeyen Yöntemle İnsan Adipoz Türevi Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürü

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:09

Yağ Doku Bağışıklık Hücre İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:09

Doku Mühendisliği vaskülarizasyon Birimleri olarak Kemirgen Yağ Dokusu kaynaklı Mikrovasküler Parçalarının İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:28

Manyetik Aktive Hücre Ayırma ile İzole Edilen Perivasküler Adipoz Doku'ndan Adiposit Progenitörlerinin Genleşmesi ve Adipogenez İndüksiyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:31

Periaortik Yağ Dokusundan Nöral Adipoz-Türetilmiş Kök Hücrelerin İzolasyon, Kültür ve Adipojenik İndüksiyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:50

Murin İntraabdominal Yağ Depolarından Adipojenik ve Fibroinflamatuar Stromal Hücre Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:17

Fare Epidididimal Yağ Dokularından Yağ Progenitör Hücrelerinin Hazırlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:50

Sprague Dawley Sıçanlarının Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026