Domuz beyninden kılcal damarların temizlenmesi

Bir domuz beyni alın.

Meningeal hücre kontaminasyonunu önlemek için beyni kaplayan koruyucu zar olan meninksleri çıkarın.

Kılcal damarlar açısından zengin bir bölge olan gri maddeyi kazıyın ve dokuyu ortam içeren bir kültür kabında toplayın.

Dokuyu parçalamak için gri maddeyi iğnesiz bir şırıngadan geçirin.

Parçaları bir homojenizatöre aktarın ve dokuyu daha fazla parçalamak için homojenize edin ve beyin kılcal damarlarını serbest bırakın.

Kılcal damarları tutmak için homojenatı belirli bir gözenek boyutuna sahip bir filtreden geçirin ve diğer beyin hücrelerinin akmasına izin verin.

Filtreyi enzimler ve DNaz içeren bir çözeltiye yerleştirin.

Enzimler yapışık hücreleri ayırırken, DNaz kirletici DNA'yı parçalayarak saf kılcal damarların izolasyonunu kolaylaştırır.

Kılcal damarları filtreden yıkayın.

Enzimleri inaktive etmek için serum proteinleri içeren ortam ekleyin.

Kılcal damarları bir tüpe, santrifüje aktarın ve süpernatanı çıkarın. Daha fazla analiz için saf kılcal damarları taze ortamda yeniden süspanse edin.

Bu işleme başlamak için, beyinleri steril bir akış tezgahına yerleştirin ve buz üzerine yerleştirilmiş bir beherde 1 litre PBS ile nazikçe yıkayın. Daha sonra, ince uçlu f