Tasarlanmış İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Nöromüsküler Kavşakların İn Vitro İndüksiyonu

Rho-kinaz inhibitörleri içeren bir kök hücre ortamında bir miyoblast farklılaşması veya MYOD protein kodlayan, doksisiklin ile indüklenebilen gen içeren tasarlanmış insan iPSC'leri ile başlayın.

Hücreleri ECM kaplı plakalara aktarın ve hücre bağlanmasını desteklemek için inkübe edin.

Bu arada, inhibitör hücre içi Rho-kinaz enzimlerini inaktive ederek hücre canlılığını arttırır.

Ortamı doksisiklin içeren bir kök hücre ortamı ile değiştirin.

Doksisiklin hücrelere girer ve aktivatör proteinlere bağlanır. Bu kompleksler promotöre bağlanarak bazı hücrelerde gen ekspresyonunu indükler ve kas hücrelerine kök hücre farklılaşmasını tetikleyen MYOD proteinleri üretir.

Hücreleri, çok çekirdekli bir kas hücresi olan miyotüplerin oluşumunu teşvik etmek için miyojenik farklılaşma faktörleri içeren miyojenik bir farklılaşma ortamı ile tedavi edin.

Daha sonra, nöral büyüme faktörlerine sahip bir nöral indüksiyon ortamı tanıtın.

Bu faktörler, kalan iPSC'leri motor nöronlara ve nöronların etrafında bir miyelin kılıfı oluşturan Schwann hücrelerine farklılaştırır.

Son olarak, motor nöron ve miyotüp arasındaki bağlantıları teşvik etmek ve nöromüsküler kavşaklar oluşturmak için ortamı bir nöromüsküler k