Fare Serebral Perisitlerinin İzole Edilmesi ve Kültürlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:43 dk. • July 8th, 2025
Fare beyin dokusuna tampon ekleyin ve hücreleri ve mikro damarları serbest bırakmak için homojenize edin.
Ardından, homojenata BSA-dextran çözeltisini ekleyin. Bileşenleri ayırmak için karıştırın ve santrifüjleyin. Süpernatanı atın.
Mikro damarları tamponda yeniden süspanse edin ve daha büyük damarları çıkararak bir filtreden geçirin.
Şimdi, süzüntüyü santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. DNAses içeren tampondaki mikro damarları yeniden süspanse edin.
Endotel hücrelerini ve perisitleri serbest bırakmak için proteolitik enzimler ekleyin.
DNazlar DNA'yı bozar.
Enzim aktivitesini durdurmak için BSA içeren tampon ekleyin. Süpernatanı santrifüjleyin ve atın.
Hücreleri ortamdaki yeniden süspanse edin ve bunları bir bodrum matrisi kaplı çok kuyulu plaka üzerine yerleştirin. İnkübe edin, hücre yapışmasını teşvik edin.
Medyayı düzenli olarak değiştirin.
Endotel hücreleri tek tabaka oluşturur ve perisit büyümesini destekler.
Jelatin kaplı çok kuyucuklu bir plaka üzerinde perisit ortamında müteakip hücre geçişi, endotel hücrelerini ortadan kaldırırken perisit büyümesini teşvik eder.
Beyni patojen içermeyen dört ila altı haftalık bir erkek C57 siyah 6 fareden steril, kuru, tüy bırakmayan bir
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin