Fare Hipokampal Dokusundan Tek Hücreli Süspansiyon Elde Edilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:42 dk. • July 8th, 2025
Papain ve DNaz içeren bir ayrışma tüpünde perfüze edilmiş yetişkin fare hipokampus parçalarını alın.
Tüpü mekanik bir ayrıştırıcı üzerine yerleştirin.
Ayrışıcı, dokuyu mekanik olarak parçalar, nöronlar ve glial hücreler dahil olmak üzere hücreleri gevşetir.
Papain, dokunun hücre dışı matrisini parçalayarak hücreleri serbest bırakır. DNaz, kirletici DNA'yı bozar.
Enzimleri inaktive ederek BSA içeren tampon ekleyin.
Büyük kalıntıları temizlemek için süspansiyonu bir süzgeçten geçirin.
Süzüntüyü santrifüjleyin. Enzim açısından zengin süpernatanı atın.
Hücreleri tamponda yeniden süspanse edin ve yeni bir tüpe aktarın.
Yoğunluk gradyan ortamı ekleyin, karıştırın ve karışımı tamponla kaplayın.
Santrifüjleme sırasında, hücreler ve döküntüler yoğunluklarına göre ayrı katmanlar oluşturur.
En üstteki arabellek katmanını ve ortadaki kalıntı katmanını çıkarın.
Hücreleri içeren alt katmana tampon ekleyin ve karıştırın. Yoğunluk gradyan ortamını içeren süpernatanı santrifüjleyin ve atın.
Daha fazla analiz için hipokampal hücreleri tamponda yeniden askıya alın.
Forseps kullanarak, hipokampi doku parçalarını bir C-tüpüne aktarın ve tüpe 30 mikrolitre enzim karışımı 2 ekleyin. Kapağı çevirdikten ve
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin