Murin Beyin Dokusundan Tek Hücreli Bağışıklık Hücrelerinin Süspansiyonunun Hazırlanması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:51 dk. • July 8th, 2025
Beynin hücre dışı matrisi veya ECM'si içinde nöral, nöral olmayan ve bağışıklık hücrelerine sahip bir murin beyni ile başlayın.
Dokuyu kıyın ve bir kültür ortamında yeniden süspanse edin.
Bu doku parçalarını bir tüpe aktarın ve kollajenaz ve DNaz-I enzimleri ile tedavi edin.
Kollajenaz, ECM'yi sindirerek tek tek hücreleri serbest bırakırken, DNase-I, hücre topaklanmasını önlemek için serbest DNA'yı bozar.
Ardından, kollajenaz enzimlerini etkisiz hale getirmek için EDTA ekleyin.
Bir kültür ortamı ekleyin. Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın.
Düşük yoğunluklu bir gradyan tabakası oluşturarak hücre peletine bir yoğunluk gradyan çözeltisi ve kültür ortamı ekleyin.
Bir yoğunluk farkı oluşturmak için çözeltiyi yüksek yoğunluklu bir gradyan çözeltisiyle karıştırın ve ardından altına yerleştirin.
Arayüzdeki bağışıklık hücrelerini ayırmak için düşük hızda santrifüjleyin, üstte daha hafif hücre kalıntıları ve altta daha ağır nöronal ve glial hücreler bulunur.
Üst tabakayı çıkarın ve bağışıklık hücrelerini toplayın ve başka bir tüpe aktarın.
Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın, ardından hücreleri bir ortamda yeniden süspanse edin ve aşağı akış uygulamaları için tek hücreli bir süspansiyon
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin