JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:12 dk • July 8th, 2025
Dış uyaranlara yanıt olarak, Drosophila beyin nöral kök hücreleri veya NSC'ler, hücre döngüsü durması durumu olan sessizlikten çıkar ve çoğalmaya başlamak için yeniden aktive olur.
Yumurtadan yeni çıkmış Drosophila larvalarını ele alalım, NSC'lerin in vivo olarak doğal olarak sessizlikten çıktığı bir aşama.
Larvaları ayırmak için ağız kancalarını ve gövdeyi kavrayın.
Ağız kancalarının arkasındaki beyni bulun ve çıkarın.
Beyinleri ortam içeren kültür plakası kuyularına aktarın.
Tedavi edilen kuyucuklarda, ortam bir test hormonu içerirken, kontrol kuyularında hormon yoktur. Kuluçkaya yatmak.
Kontrol koşulları altında, NSC'ler dış uyaranların olmaması nedeniyle hareketsiz kalır.
Tedavi edilen kuyularda, hormon spesifik NSC reseptörlerine bağlanır, aşağı akış sinyal yollarını aktive eder ve NSC'leri yeniden aktive eder.
Yeniden aktive edilen NSC'ler hücre döngüsüne girer ve proliferasyona uğrar.
Kuluçka sonrası, beyinler artık NSC proliferasyonunu görselleştirmek için aşağı akış analizine hazırdır ve hormonun yeniden aktivasyon potansiyelini doğrular.
SSM ile ikinci cam saat çanağına yerleştirilen larvaların beyinlerini, diseksiyon mikroskobu altında forseps kullanarak ve büyütmeyi gerektiği gibi ayarlayarak inceleyin. Ağız kancalarını tutmak için bir forseps kullanın ve diğeriyle vücudu nazikçe yarıya kadar tutun ve larvaları iki parçaya bölmek için ters yönde çekin. 15 ila 20 beyni inceledikten sonra, steril 24 oyuklu bir kültür tepsisinin bir oyuğuna 1 mililitre SSM ekleyin. Bir mikropipet ve steril bir uç kullanarak, yeni disseke edilmiş beyinleri SSM'ye aktarın, ardından ortamın beyinlerle 25 santigrat derecede 24 saat boyunca inkübe edilmesi.