Endotel Hücreleri ile Birlikte Kültür Yapılırken Nöral Hücre Yüzey İşaretleyicilerini Azidosugar ile Etiketleme

Bir transwell plakasının geçirgen membran ekine bir fare beyni endotel hücresi süspansiyonu ekleyerek başlayın.

Dibe bir büyüme ortamı ekleyin ve inkübe edin.

Ortamdaki büyüme faktörleri ve besinler, hücrelerin tek tabaka olarak büyümesine yardımcı olur.

Ortamı alttan ve ek parçadan çıkarın.

Kalıntıları temizlemek için ekin iç ve dış yüzeylerini yıkayın.

Kesici uca yapışık bir ortam ekleyin ve ek parçayı, birincil kortikal nöral kök ve progenitör hücreleri veya NSPC'leri içeren matris kaplı bir kuyucuğa aktarın ve inkübe edin.

Hem endotel hücrelerine hem de NSPC'lere doğal olmayan bir sialik asit öncüsü analoğu olan azidosugar ekleyin ve inkübe edin.

Endotel hücreleri tarafından salgılanan sitokinler ve kemokinler, NSPC'lerin büyük tabaka benzeri klonlara büyümesini teşvik eder.

Azidosugarlar, NSPC hücre yüzeyindeki sialoglikan yapılarına entegre olur ve glikoproteini etiketler. Bu, genişlemiş NSPC'ler üzerindeki hücre yüzey proteinlerinin tanımlanmasını sağlar.

Endotel hücrelerini hazırlamak için, bir BEND3 hücre peletini 0.10 santimetrelik bir petri kabından 9 mililitre BEND3 hücre ortamı ile% 90 birleşimde yeniden süspanse edin. 1 mililitre hücre süspansiyonunu bir geçirgen dest