JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:27 dk. • July 8th, 2025
Sığır kuyruğu al.
Üstteki dokuyu ve vertebral süreçleri çıkarın, ardından segmentler elde etmek için enine kesin.
Büyüme plakaları ve vertebral uç plakaları arasında bulunan intervertebral diski veya IVD'yi tanımlayın.
IVD'nin her iki tarafını kesin ve doku canlılığını korumak için tampona batırılmış gazlı bez içeren bir kaba koyun.
Bağlı herhangi bir omur dokusunu kazıyın ve IVD yüksekliğini ölçün.
Kan kalıntılarını gidermek için tamponla yıkayın ve IVD'yi antibiyotik içeren bir tamponda dezenfekte edin.
IVD'leri ortam içeren biyoreaktör odalarına yerleştirin.
Fizyolojik gruptaki ortam yüksek glikoza sahipken, patolojik grupta düşük glikozlu bir ortam besin yoksunluğuna neden olur.
Odaları biyoreaktöre yerleştirin.
Fizyolojik IVD için her gün hafif bir yük uygulayın. Patolojik IVD için günlük olarak daha yüksek oranda yoğun bir yük uygulayın.
Günlük yükleme testleri arasında, IVD'lerin ortamda iyileşmesine izin verin.
Tüm yükleme prosedürlerinden sonra IVD yüksekliklerini ölçün.
Patolojik IVD'lerde azalmış bir yükseklik, dejeneratif ve proenflamatuar bir durumu gösterir.
Yüzeydeki kiri ve tüyleri temizlemek için tüm sığır kuyruğunu musluk suyuyla iyice durulayarak başlayın. Ardından, yüzeyi dezenfekte etmek için kuyruğu 10 dakika boyunca% 1 betadin çözeltisine batırın. İntervertebral disklerin veya IVD'lerin tanımlanmasını kolaylaştırmak için yumuşak dokuyu kaudal omurgadan çıkarmak için 20 numaralı bir neşter kullanın.
Omurların dikenli ve enine süreçlerini bir kemik çıkarma pensesi ile çıkarın. Bireysel hareket segmentleri elde etmek için her bir omur gövdesinin ortasından kemik pensesi ile enlemesine kesin, ardından toplanan hareket segmentlerini Ringer solüsyonunda ıslatılmış bir gazlı bezle bir Petri kabına koyun.
Hareket segmentlerini nazikçe hareket ettirerek IVD'yi ve omurları bulun. Ardından, kemikli uç plakanın dışbükey tarafına dokunarak ve bularak büyüme plakasının konumunu belirleyin. Şerit testerenin bıçağını Ringer solüsyonu ile soğutun ve IVD'lerin büyüme plakasında her iki tarafta birer tane olmak üzere iki paralel kesim yapmak için kullanın.
IVD'leri, Ringer solüsyonu ile ıslatılmış temiz gazlı bez ile temiz bir Petri kabına aktarın. Neşter bıçağını kullanarak omur gövdesini ve büyüme plakasını kazıyın ve uç plakayı sağlam bırakın. Yükleme prosedürü için iki yüzeyi düz ve paralel olarak konumlandırın ve kazınmış IVD'leri Ringer solüsyonu ile ıslatılmış gazlı bezle taze bir Petri kabına aktarın.
Disk yüksekliğini ve çapını bir kumpas ile ölçün. Ardından, bir jet lavaj sistemi kullanarak omur kemiğindeki kan pıhtılarını Ringer solüsyonu ile temizleyin. IVD'leri PBS ve% 10 penisilin-streptomisin içinde 15 dakika çalkalayarak dezenfekte edin. Yüksek konsantrasyonlu antibiyotikleri PBS ve% 1 penisilin streptomisin ile durulayın.
Diskleri 5 mililitre IVD kültür ortamı içeren IVD odalarına aktarın ve bunları %85 nem ve %5 karbondioksit ile 37 santigrat derecede bir inkübatörlü biyoreaktör sistemine yerleştirin. Deney gruplarına göre farklı yükleme koşullarını koruyarak diskleri bir biyoreaktör sistemi içinde dört gün boyunca kültürleyin.
Fizyolojik kontrol grubunda, günde iki saat boyunca 0.02 ila 0.2 megapaskal ve 0.2 Hertz'lik bir yükleme protokolü kullanarak IVD'leri yüksek glikoz ortamı ile kültürleyin. Patolojik grupta, günde iki saat boyunca 0.32 ila 0.5 megapaskal ve 5 Hertz'lik bir yükleme protokolü kullanarak düşük glikozlu ortam ile IVD'leri kültürleyin.
Yükleme prosedürleri arasında, serbest şişme geri kazanımı için IVD'leri 7 mililitre IVD kültür ortamı içeren altı oyuklu plakalara yerleştirin. Serbest şişme periyodundan sonra ve deney süresi boyunca dinamik yüklemeden sonra disk yüksekliğini günlük olarak bir kumpas ile ölçün.