Fare Embriyonik Kök Hücrelerini Ağa Bağlı Bir Nöron Popülasyonuna Farklılaştırmak

Tohum fare embriyonik kök hücreleri, farklılaşma ortamı içeren düşük bağlantılı bir kapta.

Hücresel agregasyonu ve nöronal bir soya farklılaşmayı kolaylaştırmak için rotasyon altında inkübe edin.

Agregaları bir tüpe aktarın ve yerçekimi ile çökelmelerine izin verin. Medyayı atın.

Agregaları yeniden süspanse edin ve retinoik asit ile desteklenmiş farklılaşma ortamı içeren orijinal tabağa aktarın.

Retinoik asit, nöronal gen ekspresyonunu indükleyerek nöral progenitör hücrelere farklılaşmayı tetikler.

Agregaları bir tüpe aktarın. Ortamı çıkarın ve agregaları ayırmak için tripsin ekleyin.

Tripsini nötralize etmek için bir inhibitör ekleyin.

Homojen bir hücre süspansiyonu elde etmek için tekrar tekrar pipetleyin. Agregaları çıkarmak için süspansiyonu filtreleyin.

Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Ortamdaki hücreleri yeniden askıya alın.

Hücre yapışmasını kolaylaştırmak için hücreleri polimer kaplı bir tabak üzerine tohumlayın.

Ortamı çıkarın. Nöronal olgunlaşmayı teşvik etmek ve ağa bağlı bir nöron popülasyonu oluşturmak için büyüme faktörleri içeren taze ortam ekleyin.

ESC'lerin nöronlara farklılaşması, rutin bir hücre geçişi sırasında başlar. ESC'leri daha önce olduğu gibi ayırın