JoVE Encyclopedia of Experiments
Sinirbilim
0 görüntüleme • 2:32 dk • July 8th, 2025
Buz gibi soğuk bir tampona batırılmış bir fare beynini ele alalım.
Beyinciği çıkarın ve medial prefrontal korteks veya mPFC'yi içeren ön bölümü kesin.
Dokuyu, bir vibratom numune aşamasına yapıştırılmış açılı bir agar bloğuna tutturun.
Dilimleme sırasında stabilite sağlamak için ek agar blokları takın. Sahneyi oksijenli buz gibi tamponla doldurulmuş vibratom kesme haznesinin içine yerleştirin.
Amigdala'da sinaptik bağlantılar oluşturan ve aktivitesini düzenleyen mPFC'den gelen korku uyaranlarına ve nöronal projeksiyonlara yanıt veren amigdala içeren eğik dilimler oluşturun.
Eğik dilimler, çıkıntıları ortaya çıkararak mPFC ve amigdala arasındaki işlevsel bağlantının incelenmesine olanak tanır.
Dilimleri ikiye bölün ve dokuyu stabilize etmek için oda sıcaklığında oksijenli yapay beyin omurilik sıvısı içeren bir odaya yerleştirin.
Aşağı akış tahlilleri için dokuyu geri kazanmak için dilimleri fizyolojik sıcaklıkta inkübe edin.
Beyincik kesmek için bir neşter kullanın. Ardından, medial prefrontal korteksi içeren beynin ön kısmını izole edin. Kesme haznesini bir soğutma ünitesi kullanarak 4 santigrat derecede tutulan buz gibi soğuk kesme solüsyonu ile doldurun. Çözeltiyi oksijenlendirin.
Beyni filtre kağıdı ile kurulayın. 35 derecelik açıyla kesilen %4'lük agar bloğunu vibrasyonlu aşamaya yapıştırın ve beyin dokusunun arka kısmını bu bloğun üzerine yapıştırın. Dilimleme sırasında stabilite için beyin bloğunun önüne ve arkasına iki ek agar bloğu yapıştırın.
Sahneyi doku takılı olarak kesme haznesine yerleştirin ve suya batırıldığından emin olun. Akut dilimleri kesmeye başlayın. Her dilimi ikiye bölün ve oda sıcaklığında oksijenli ACSF ile sağlanan bir arayüz odasına aktarın. Akut amigdala dilimlerini kestikten sonra, arayüz odasını 36 santigrat derecede bir su banyosuna yerleştirin ve dilimlerin 35 ila 45 dakika iyileşmesine izin verin.