JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:43 dk. • July 8th, 2025
Soğuk bir homojenizasyon tamponunda bir fare beyninden dentat girus alın.
Nöronları, gliaları ve kök hücreleri serbest bırakmak için mekanik olarak ayrışır.
Tamponun hafif deterjanı hücrelere nüfuz ederek çekirdekleri ve diğer organelleri serbest bırakır.
Doku kalıntılarını gidermek için homojenatı filtreleyin. Daha sonra santrifüjleyin, organelleri çıkarın ve sağlam hücreleri parçalamak için homojenizasyon tamponunda yeniden süspanse edin.
Tekrar santrifüjleyin, salınan organelleri içeren süpernatanı çıkarın ve çekirdekleri bir yıkama tamponunda yeniden süspanse edin.
Herhangi bir kalıntıyı, santrifüjü çıkarmak ve süpernatanı çıkarmak için filtreleyin.
Tüm çekirdekleri etiketlemek için bir floresan DNA boyası ve nöron çekirdeklerini etiketleyen nöronal nükleer antijene veya NeuN'ye bağlanan florofor konjuge bir antikor ekleyin.
Floresanla aktive edilen çekirdek sıralamasını kullanarak, tek çekirdekleri ayırarak daha yüksek DNA lekesi floresan yoğunluğuna ve daha yüksek saçılma özelliklerine sahip agregaları tanımlayın.
NeuN pozitif nöronal çekirdekleri ayırarak ve glia ve kök hücrelere ait NeuN negatif çekirdekleri izole ederek tek çekirdekleri analiz edin.
Dokuyu 10 vuruş gevşek
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin