Manyetik Aktif Hücre Sıralaması Kullanılarak Fare Beyni Demiyelinizan Lezyonlarından Mikroglia'nın İzole Edilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:09 dk. • July 8th, 2025
Bir fare beyninin korpus kallozumundan lekeli demiyelinizan lezyonları inceleyin.
Bu lezyonlar, hücre yüzeyi integrini CD11b'yi eksprese eden beyinde yerleşik mikroglia içerir.
Dokuyu toplayın ve bir proteolitik enzim ve DNaz içeren bir çözelti ekleyin.
Enzim hücre dışı matrisi bozarken, DNaz serbest DNA'yı bozar.
Soğuk tampon ekleyin ve hücresel kümeleri çıkarmak için süspansiyonu bir süzgeçten süzün.
Santrifüjleyin, süpernatanı atın ve peletlenmiş hücreleri bir yoğunluk gradyan ortamında yeniden süspanse edin.
Üst katmanlarda kalan kalıntıları toplamak için tampon ve santrifüj ile kaplayın; sağlam hücreler dibe çöker.
Kalıntıları çıkarın ve hücreleri bir tamponda yeniden askıya alın.
Mikroglia'yı etiketlemek için anti-CD11b manyetik boncuklar ekleyin.
Hücreleri, manyetik ayırıcının manyetik alanına yerleştirilmiş ferromanyetik küreler içeren bir sütuna yükleyin.
Dış manyetik alan altında, boncuk bağlı mikroglia, bağlanmamış hücreler akarken kolonda tutulur.
Sütunu manyetik alandan çıkarın. Mikroglia'yı elüte etmek için bir tampon ekleyin.
Korpus kallozum etrafında nötr boya ile işaretlenmiş lezyonları stereomikroskop altında mikrodiseke ederek başlayın. Numuneyi tüpün dibinde top
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin