İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Mikroglia Benzeri Hücrelere Farklılaştırılması

JoVE Encyclopedia of Experiments

Sinirbilim

0 görüntüleme • 4:03 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir embriyoid cisimcikte veya EB ortamında insan kaynaklı pluripotent kök hücreler içeren düşük yapışmalı çok kuyulu bir plaka ile başlayın.

Hücreleri yerleştirmek için santrifüjleyin. Embriyoid cisimleri oluşturarak hücre proliferasyonunu ve agregasyonunu teşvik etmek için kuluçkaya yatırın.

Hücre soy düzenleyicileri, miyeloid progenitörlere hücre farklılaşmasını teşvik eder.

Bu EB'leri toplayın ve hücre dışı bir matrisin veya ECM kaplı bir plakanın kenarına aktarın.

Ortamı ilkel bir makrofaj öncüsü veya PMP farklılaşma ortamı ile değiştirin ve hafifçe çalkalayın. EB'lerin ECM'ye bağlanmasını kolaylaştırmak için kuluçkaya yatırın.

Ortamın yarısını değiştirin ve inkübe edin.

Hematopoietik büyüme faktörleri, miyeloid progenitörleri, EB'lerden ayrılan ve ortamda ortaya çıkan ilkel makrofaj öncülerine farklılaşmaya yönlendirir.

Bu PMP'leri toplayın ve hücreleri aşağı doğru döndürün. Bunları bir mikroglia farklılaşma ortamında yeniden süspanse edin.

Bu hücreleri laminin kaplı çok kuyulu bir plakaya tohumlayın ve inkübe edin.

PMP'ler, bir tür beyin bağışıklık hücresi olan mikroglia benzeri hücrelere farklılaşan farklılaşma faktörlerini ve besinleri kullanır.

Hücreleri kaplamak için, düşük yapışma özelliğine sahip yuvarlak tabanlı 96 oyuklu bir plakaya oyuk başına 100 mikrolitre seyreltilmiş hücre ekleyin. Plakayı üç dakika boyunca 125 kez g'de santrifüjleyin ve dört gün boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin.

2. günde, çok kanallı bir pipet kullanarak eski yarım EB ortamını yeni bir ortamla değiştirin. İlkel makrofaj öncüleri veya PMP'ler oluşturmak için, 1 mililitre buz gibi soğuk matrigel kaplama çözeltisi ekleyerek 6 oyuklu bir plakanın kuyularını kaplayın. Ardından, plakayı iki saat veya gece boyunca 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte inkübe edin.

EB farklılaşmasının 4. gününde, 1 mililitrelik bir pipet ucu kullanarak, EB'leri matrigel kaplı kuyucuklara aktarın. EB'leri kuyudan çıkarmak için yukarı ve aşağı pipetleyin. Ardından, EB'lerin kuyunun kenarına yerleşmesine izin vermek için plakayı eğik tutun.

Tüm EB'ler çöktükten sonra, EB'leri 3 mililitre taze hazırlanmış PMP tam ortamı ile kuyunun kenarında tutarken eski ortamı nazikçe pipetleyin ve değiştirin. Plakaları yan yana ve arkadan öne manuel olarak karıştırarak hücreleri kuyucuklara eşit olarak dağıtın. Ardından, EB'lerin kuyunun dibine yapışmasını sağlamak için plakayı yedi gün boyunca inkübe edin.

Yedi gün sonra, kuyuların dibine takıldıklarından emin olmak için EB'leri 4 kat büyütmede bir ışık alanı mikroskobu altında inceleyin. Yarım orta bir değişiklik yapın ve 21. günde, tam ortamı 3 mililitre PMP tam ortamla değiştirin.

28. günde, süpernatantta PMP olarak adlandırılan yuvarlak hücreleri arayın. Ardından, EB'leri rahatsız etmeden 10 mililitrelik bir pipet ve otomatik pipetleyici kullanarak PMP'leri içeren ortamı toplayın.

Ortamdaki PMP'leri 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Toplanan PMP'leri dört dakika boyunca 200 kez g'de santrifüjleyin ve süpernatanı 1 ila 2 mililitre mikroglia benzeri hücrelerde veya IMG bazal ortamda yeniden süspanse etmeden önce aspire edin.

Ardından, daha önce açıklandığı gibi hemositometre üzerindeki hücreleri sayın. Hücrelerin geri kalanını santrifüjleyin ve PMP'leri istenen konsantrasyona seyreltin. Daha sonra, hücreleri, yeni hazırlanmış IMG tam ortamı kullanarak hücre kültürü ile muamele edilmiş plakalar üzerine santimetre kare başına 105 hücre yoğunluğunda plakalayın.

08:05

Pluripotent Kök Hücrelerden İnsan Makrofajlarının Üretimi ve Karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:56

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Makrofajlara Farklılaşması

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:33

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Mikro Elektrot Dizileri Üzerinde Nöronlara Farklılaşması

İlgili videolar

0 Görüntüler

02:16

Transgenik Olmayan ve Transgenik İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinin Nöral Progenitör Hücrelere Ayırt Edilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:02

Nörotoksisite Testi İçin İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Nöronlar ve Glia Karışık Kültürlerine Ayrıştırılması Protokolü

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:32

Kalıtsal Spastik Paraplejide İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Nöronlarda Mitokondriyal Taşıma ve Morfolojinin Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:09

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerde Multipl Mitokondriyal Parametrelerin ve Nöral ve Glial Türevlerinin Akış Sitometrik Analizi

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:35

İmmünkompetan Farelerin Beyinde Non-invaziv Transnazal Yolla İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Mikroglia Transplantasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

11:19

İnsan Mikroglia Benzeri Hücreler: İnsan Sinaptozomları Kullanılarak İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden ve In Vitro Canlı Hücre Fagositoz Analizinden Farklılaşma

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:12

Ters Translasyonel Beyin Araştırmaları için İnsan Kanı Kaynaklı Mikroglia Benzeri Hücrelerin Mühendisliği

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 1 Ağustos 2026